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ATCC细胞培养
货号：IMP-H184
规格：5x105cells/T25或1mL冻存管
培养基：人源心肌细胞专用培养基
传代特征：心肌细胞是终末分化的功能细胞，与人体内的心肌细胞性质相同，不能增殖扩增
细胞冻存：冻存细胞存于-80℃冰箱，2周有效期；长期需液氮储存
价格：¥9200
产品规格：100 mL
¥68
产品规格：100 mL
¥80
产品规格：50mL *10
¥3500
人源心肌细胞（正常型）是一种即用型的高纯度心肌细胞产品。将诱导多能干细胞高效分化、纯化而成。心肌细胞主要由具备自主电生理活动的心室肌样细胞组成，同时也包含少量心房肌和窦房结样细胞。这些细胞表达常规的心肌特异性基因，包括多种收缩蛋白和离子通道。同时，心肌细胞具备经典的心肌细胞电生理活性，能够对电学、生物化学和机械刺激做出心肌细胞的常规反应。以电生理和钙转导信号记录为例，这些细胞可以作为新药筛选，毒理学测定和其他生理学研究的理想工具。
| 一、细胞基本属性 | ||||
| 细胞名称 | 原代人源心肌细胞（IPSC诱导心肌细胞） | |||
| 种属来源 | 人 | |||
| 产品规格 | 5x105cells/T25或1mL冻存管 | |||
| 培养基 | 人源心肌细胞专用培养基 | |||
| 产品优势 | 高纯度人源细胞：与传统鼠源心肌细胞不同，心肌细胞是一种高纯度的体外人源细胞。严格的质检把控，确保心肌细胞纯度达95%以上。特有人类心肌细胞属性。 动作电位：具备正常人类心脏的标准电生理学特征，受到电刺激后产生搏动。 收缩功能：具备正常人类心脏的电收缩偶联，具备心脏特有的收缩功能，自主搏动节律接近成人窦性心律。 离子通道：具备正常人类心肌细胞的绝大部分离子通道，为科学研究提供更准确的模型疾病特异型细胞通过重编程疾病特异型体细胞，例如表皮成纤维细胞及CD34+血细胞。 | |||
| 传代特征 | 心肌IPSC诱导心肌细胞是终末分化的功能细胞，与人体内的心肌细胞性质相同，不能增殖扩增 | |||
| 冻存细胞 | 冻存细胞存于-80℃冰箱，2周有效期；长期需液氮储存 | |||
| 产品视频 | ||||
| 产品货期 | 7-8周左右 | |||
| 运输方式 | T25培养瓶/ 顺丰快递（包邮） | |||
| 供应限制 | 仅限于科学研究，绝不可作为动物或人类疾病的治疗产品使用 | |||
| 特别说明 | 以下细胞培养冻存处理仅供参考，具体操作步骤以随货产品说明书为主 | |||
| 二、细胞培养操作 | ||||
| 需要材料 | 1.DPBS, No Calcium, No Magnesium 2.RPMI1640 3.FBS | |||
| 心肌细胞进行再接种 | a.如果需要将心肌细胞按合适密度接种到新的培养皿/瓶中，可对心肌细胞进行再接种，再接种操作会导致20%左右的细胞死亡，即损失20%的细胞。 b.室温平衡心肌细胞复苏液、DPBS溶液，37℃预热心肌细胞消化液。 c.取出心肌细胞铺板液包被过的培养皿/瓶，吸去心肌细胞铺板液并加入适量心肌细胞复苏液，置于5%CO 2 的37℃恒温细胞培养箱中。 d.吸除心肌细胞培养基，加入DPBS溶液清洗一次。 e.移除DPBS，加入预热的心肌细胞消化液使之完全覆盖皿/瓶底。 f.37℃孵育3-5分钟，显微镜下观察到大部分细胞相互分离，表明达到理想的消化时间。 g.向皿/瓶中加入消化液3-5倍体积的RPMI1640+10%FBS终止消化，用枪扇形吹打培养皿/瓶底，使皿/瓶底贴附的心肌细胞脱落，将细胞转移至15ml 离心管中，再加入适量中和液冲洗皿/瓶底，收集剩余细胞加入15ml离心管中，300g离心5分钟。 I .小心移除上清，用心肌细胞复苏液重悬细胞，轻柔吹打混匀，并接种到包被过的培养皿/瓶中，十字晃动使细胞均匀分布。 II.5%CO 2 的37℃恒温培养箱中培养24-48小时后，更换为心肌细胞培养基继续培养。 III.心肌细胞需要在二氧化碳培养箱中继续培养2-8天恢复搏动；此期间心肌细胞需要每隔48h换一次心肌细胞培养基。 重要提醒：吹打力度要轻柔，避免损伤细胞。亦可用心肌细胞培养基+10%FBS终止消化。 | |||
| 培养材料准备 | 心肌细胞铺板液包被培养皿/瓶：在4℃冰面上，往培养皿/瓶中添加心肌细胞铺板液至完全覆盖皿/瓶底(建议1ml/六孔板单孔)，37℃包被1小时。如果暂时不用，可用塑封膜封口后2-8℃储存，并于1周内使用，保存期间心肌细胞铺板液需始终保持完全覆盖皿底。 重要提醒：操作时需要将铺板液始终置于冰上；正确操作下铺板液应呈清亮，若操作时间过长或温度过高，铺板液会变得粘稠甚至呈胶状，不宜使用。 | |||
| 心肌细胞复苏(适用于冻存的细胞） | a.将心肌细胞复苏液从4°C冰箱中取出，室温平衡30分钟。 b.打开水浴锅，设定温度为37°C。 c.开启生物安全柜进行紫外灭菌30分种。 d.在冰上将1ml心肌细胞铺板液加入6孔板的一个孔中(0.1ml/cm 2 )，随即前后左右晃动6孔板，使铺板液均匀覆盖孔的表面。 e.将剩余铺板液迅速放回冰箱，将6孔板放入细胞培养箱中孵育1小时。 f.取出孵育好的6孔板，放于生物安全柜中，吸除心肌细胞铺板液后，立刻在孔内加入1ml 心肌细胞复苏液。 g.从高效液氮储存罐中取出需要复苏的细胞，将其放于干冰中暂存。 h.从干冰中取出细胞，迅速将冻存管的下1/2没入水浴锅中，轻柔晃动1-2分钟至管中仅剩一小块冰时，将其取出。 i.75%酒精擦拭冻存管表面后，将其放入生物安全柜中，拧开管盖，用1ml枪尖轻柔的将管中液体尽可能多的转移至15ml离心管中，用1ml心肌细胞复苏液轻柔冲洗冻存管，以5秒钟一滴的速度将冲洗液缓慢滴加入15ml离心管，边滴加边轻柔晃动离心管。 j.再用枪尖以同样速度，滴加1ml心肌细胞复苏液至15ml离心管，边滴加边轻柔晃动离心管。 k.用移液管由慢（2秒钟一滴）到快的滴加9ml心肌细胞复苏液，同时轻柔晃动离心管。300g离心5分钟。 l.在生物安全柜内吸除上清，用2ml移液管取1ml心肌细胞复苏液轻柔吹打细胞沉淀3-5次后，将其加入6孔板中，前后左右十字晃动混匀（可按比例稀释计数）。 m.显微镜下观察，细胞均匀分布。 n.在6孔板上标记好细胞名称、日期以及操作人员后，将其放入细胞培养箱，再次前后左右晃动混匀，放入细胞培养箱种培养24-48小时至绝大多数细胞贴壁后即可换液为心肌细胞培养基。 重要提醒：心肌细胞复苏计数后，可按需求接种至需要的培养容器； 心肌细胞培养时，按照推荐的密度接种，能够抑制成纤维细胞生长速度； 重要提醒：心肌细胞复跳后，建议继续培养1-2天稳定细胞状态。 | |||
| 心肌细胞维持 | a.将心肌细胞培养基室温平衡30分钟。 b.将心肌细胞用心肌细胞培养基培养，每48小时换液一次。更换时，贴壁加入培养基避免刮碰细胞；亦可加入标准量150%的心肌细胞培养基，每72小时换液一次。 重要提醒：细胞在6-8周内性状稳定。如果需要长期培养，为了维持细胞稳定性和纯度，需要定 期采用心肌细胞纯化液进行处理,一般每6周处理一次 | |||
| 注意事项 | 1.运输用的培养基（灌液培养基）不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的完全培养基来培养细胞。 2.因运输问题，部分细胞由于温度变化及剧烈碰撞死亡破碎形成碎片，是正常现象。请及时和我们联系，告知细胞的具体情况，以便我们的技术人员跟踪回访直至问题解决。 3. 申请售后时请提供细胞收货时及反馈售后当天细胞清晰照片及培养信息，建议客户在细胞传代培养后，定期拍照、记录细胞生长状态。 4.所有动物细胞均视为有潜在的生物危害性，必须在二级生物安全台内操作，并请注意防护，所有废液及接触过此细胞的器皿需要灭菌后方能丢弃。 5. 细胞在不同实验室培养由于所使用培养基及血清品牌、个人操作习惯、培养瓶品牌等诸多培养条件不尽相同，导致细胞培养形态、生长速度、贴壁情况均可能有所差异，对于此类细胞适应环境生长的行为，不予过度解释或免费售后。 | |||
| 三、细胞冻存操作 | ||||
| 冻存液配方 | 无血清冻存液，液氮储存 | |||
| 冻存密度 | 如果是有要求每管要冻多少细胞，那就用1ml完培重悬后，取部分按平时方法计数，剩下的细胞按计数需要的细胞量冻存即可。 如果没要求，那就按平时，一个皿冻一管。 | |||
| 冻存方法 | 待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。下面 T25 瓶为例 1.收集细胞及细胞培养液，装入无菌离心管中，1000 rpm条件下离心4 min，弃去上清液，用PBS清洗一遍，弃尽PBS，加1 mL血清重悬细胞，进行细胞计数。 2.根据细胞数量加入无血清细胞冻存液，使细胞密度5x106~1x107/mL，轻轻混匀，每支冻存管冻存1mL细胞悬液，注意冻存管做好标识。 3.将冻存管放入-80℃冰箱，24 h后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。 | |||
| 注意事项 | 冻存细胞转入液氮后及时复苏一管检查细胞冻存活性，若有异常，及时调整实验方案 | |||
细胞培养时培养基是否需要预热
细胞培养时培养基需要预热。预热培养基可以减少环境的改变对细胞状态的影响，避免细胞因温度变化而产生应激反应，从而保持细胞的健康状态和生长环境的一致性。可以提前半小时左右，将培养基、PBS和胰酶在37°C下预热，把所需耗材和其他物品放置于超净工作台中紫外照射灭菌。
血清使用前需不需要灭活
一般培养细胞所使用的血清不需要灭活，灭活会导致血清部分营养损失、沉淀增多，灭活的优势(主要是灭活补体以免影响细胞生长)在实际培养过程中对于促进细胞生长并没有太大意义。部分细胞对于生长条件敏感，可以尝试灭活血清培养，但大部分细胞并不需要。
血清融化后有沉淀会影响细胞培养吗
血清沉淀主要是纤维蛋白等蛋白、磷酸盐、脂类等经冻融后析出，导致血清内出现沉淀现象，该现象与血清品质无关，大部分品牌的血清都会有这种情况，不会影响细胞培养，只是培养时可能偶尔观察到血清沉淀，注意区分血清沉淀和细胞污染即可。
细胞为何生长不均匀
细胞传代后放入培养箱没有摇匀，或者放入时摇匀，但在细胞贴壁前，又移动了培养瓶，频繁开关培养箱引起的振动或者培养瓶中培养液过少，培养箱搁板表面不平整，这些因素会导致细胞生长不均匀。
细胞抱团怎么处理
一些悬浮细胞抱团生长是正常现象，大部分悬浮细胞在细胞密度很高的情况下，很可能会出现部分细胞抱团生长的现象，聚团细胞很容易死亡并演化成絮状物，殃及周围的悬浮细胞，因此在培养悬浮细胞时需控制好细胞密度。如果出现了细胞团，可以通过细胞筛去掉部分较大的细胞团，也可以尝试一下方法：将细胞悬液收集到15 ml离心管中，静置20 min左右，小心取上层细胞上清培养(该方法只能去除部分较大的细胞团)。
细胞内有空泡，是否是正常现象
部分细胞本身存在一定的空泡(如HepG2，Ishikawa及一些耐药株等)，这个是正常现象。如果只有少数细胞有内出现极少空泡，则很可能是细胞状态不佳，可以通过调整血清浓度，控制消化，控制传代比例及时间等方法来调整细胞状态;如果大部分细胞出现空泡，且单个细胞内空泡数目偏多，则可能细胞代次较高，细胞老化所致，需更换代次较早的细胞。
细胞传两代后开始逐渐死亡的原因
很可能是培养体系不适合细胞(未使用推荐的培养体系)；或者消化过度，对细胞有严重影响；或者是传代比例不合适(具有密度依赖性的细胞，传代太稀；或者生长较快的细胞，传代较密，细胞严重堆叠生长)。
如何区分活细胞和死细胞
显微镜下观察：活细胞中间透亮，饱满，有光泽，死细胞较暗。也可以通过台盼蓝染色来计算细胞活力。
何用台盼兰计数活细胞
用无血清培养基把细胞悬液稀释到200～2000 个/毫升，在0.1 毫升的细胞悬液中加入0.1 毫升的0.4%的台盼兰溶液。轻轻混匀，用血球计数板计数细胞。活细胞排斥台盼兰，因而染成蓝色的细胞是死细胞，注意计数需在加入台盼蓝10min内完成。有细胞计数仪的，可直接用计数仪进行
何时须更换培养基
视细胞生长密度而定，常规细胞2天更换培养基。
细胞何时进行传代较好
一般情况下细胞生长至完全汇合后就应该传代，所有细胞生长都有一个要求不宜生长过密(也就是常说的长老了)，但有接触抑制的细胞，在汇合前就必须进行传代，这类细胞一般在密度70-80%就进行传代，否则会引起细胞分化。
贴壁细胞总有部分圆形还会有一些漂浮的是正常吗
大部分贴壁细胞培养时都会有一些圆形透亮的细胞存在，也会有一些圆形细胞脱落悬浮的情况存在，这种主要是一些新增殖的细胞或由于局部空间不足被挤出的细胞，只要细胞持续增殖，都会有一些圆形细胞或脱落漂浮细胞，不影响细胞整体增殖和实验，保持正常换液、传代周期即可。细胞具体情况也可以参考细胞库不同细胞照片比对，大部分贴壁细胞都会有圆形细胞、脱落细胞、细胞内颗粒等情况。
细胞内很亮小泡泡是什么东西
一部分情况下细胞内小亮点是细胞内黑色颗粒或者一些粘附在细胞表面的碎片，这种黑点会在调整显微镜焦距时呈小黑点或者小亮点，容易被误认为细胞内小泡，其实只是细胞内部或表面一些物质折光形成的光学现象。也有些是细胞内部脂滴，例如3T3-L1细胞在部分培养条件下可以明显看到内部脂滴，染色后更加清晰。
部分细胞在培养时确实可能会有空泡，可以参考细胞库照片比对。若细胞突然出现细胞内空泡增多现象，通常是细胞受到压力的表现，原因可能是培养基中缺乏谷氨酰胺、添加抗真菌剂、不适当的CO2环境对培养基中碳酸氢钠浓度影响或培养基的营养消耗殆尽。
细胞培养出现小黑点、污染如何防范
可从以下几个方面进行判断： 细胞小黑点如何判断 1、运动性：很多会动的小黑点，只是发生布朗运动的细胞碎片。从运动性上比较，浮躁的细菌活跃的多。 2、培养基的浑浊度：如果在显微镜下无法辨认，那就交给时间吧。细胞培养基对于细菌来说是非常营养的大餐。一旦发生污染，细菌就会大量繁殖。培养基PH值迅速下降，培养基变黄且会变浑浊。通常在12小时内就可以发现，而在48小时内就非常明显。被污染的细胞培养基变黄且浑浊、未被污染的细胞培养基偏红且澄清。 3、接种平板：将怀疑污染物接种在微生物培养平板中，观察菌落形成情况。碎片?细菌?一目了然。
细胞培养形态与ATCC等官网照片有点区别正常吗?
由于每个实验室培养环境、操作方法、培养基及血清品牌批次不同，细胞实际培养形态、状态、生长速度等培养特性均有可能发生改变，甚至显微镜拍摄效果对细胞形态判断都会有有一定影响。因此细胞形态只能作为实验过程中的参考项目，无法作为细胞状态或者类型的判断依据。实际上，细胞在不同细胞库培养的细胞形态都可能存在一定差异。
问：为什么官网的培养条件和我看的文献里细胞培养条件不一样呢？
答：部分细胞是会出现多种培养条件，我们公司优先选择引种来源的培养条件以及建系者所用培养条件，出现差异的原因是不同实验室在保藏过程中更改了细胞的培养条件，为了避免细胞突然更换培养条件后不适应，建议老师使用厂家推荐的培养条件培养。
问：冻存细胞运输与常温细胞运输相比有什么区别？
答：细胞株发货有常温或者冻存两种形式，常温细胞货期一般一周左右，复苏活细胞一个T25瓶发货；冻存细胞有库存的话，一般当天或者隔天可以发货，细胞系冻存细胞担心客户复苏不成功所以赠送了一管，实际发货2管；原代冻存细胞发货1管，冻存细胞发货是10公斤干冰及顺丰运输，所以冻存细胞需额外支付干冰及运输费200元。
问：培养细胞的培养瓶可以重复利用吗？
答：一般不建议重复利用，特别是贴壁不牢固细胞，重复利用会导致吸附性变差，漂浮增多;一个T25瓶建议使用最多不超过3次，其次需要注意无菌操作，避免污染。
问：运输细胞用的培养基可以回收使用吗?
答：不能回收使用的，运输用的培养基(灌液培养基)营养在路上已经消耗得差不多，所以收到细胞之后，培养箱静置4-6h之后，请及时按照说明书细胞培养条件更换新鲜培养液培养。
问：冻存的细胞出现颜色不一致，有的红有的粉，对复苏会有影响吗？
答：这种情况容易在不同冻存批次间出现，与冻存细胞的密度、冻存液配方、温度导致pH变化等有关，偶尔有遇到这种情况，不是绝对性对细胞状态有影响，可以复苏看下。
问：不同引种单位的同一株细胞，RRID都是一样的吗？
答：是的，同一个细胞系只有一个RRID。
1.细胞运输途中遭遇的各种问题，细胞丢失、瓶身破损、培养液严重漏液，细胞未开封，如出现污染状况等，重发
2.细胞免费售后期为一周，一周内细胞培养出现异常及时拍照反馈。超出一周没有任何反馈视为细胞培养正常，后期若出现培养问题不再免费重发
3.申请售后时请提供细胞收货时及反馈售后当天细胞清晰照片及培养信息，若无清晰照片及相应信息，不予免费售后
4.售后仅针对由于细胞自身状态问题导致不可传代的情况，若客户收货一周内已经传代或转移细胞多次，出现死亡或者污染时不予免费售后
5.冻存细胞发货2管，客户先复苏一支，若复苏失败及时联系我方并在我方指导下复苏第二支。若客户未反馈并复苏2管失败，我方将不提供免费售后服务。冻存细胞售后均发复苏培养，若要重发冻存细胞，需补加200元干冰运输费用
6.客户自行冻存细胞一定要注意冻存后复苏一管检查冻存活性，避免冻存死亡导致绝种。我方不对客户冻存细胞死亡负责，客户冻存细胞死亡时不予免费售后
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