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ATCC细胞培养
未开封产品于 -20℃ ~ -5℃ 避光保存，有效期24个月。
解冻后置于 2~8℃ 避光保存，请勿重新冻存。
请勿室温保存。在正确储存条件下，有效期内产品稳定。
产品规格：100mL/50mL
价格：￥750
产品规格：100 mL
¥68
产品规格：100 mL
¥80
产品规格：50mL *10
¥3500
Accutase 细胞消化液是一种即用型细胞分离溶液，含有蛋白水解酶和胶原蛋白水解酶活性。本品不含动物源或细菌源成分，适用于常规细胞培养塑料器皿及包括基质胶在内的包被器壁上贴壁细胞的常规消化分离。Accutase 细胞消化液可在细胞消化程序中直接替代胰蛋白酶(Trypsin)，无需使用灭活试剂。与动物来源的胰蛋白酶等酶类相比，Accutase 能维持更高的细胞活力，尤其适用于原代细胞和干细胞的消化分离。
Accutase 处理后的细胞可用于多种下游应用，包括细胞表面标志物分析、病毒生长检测、细胞增殖研究、肿瘤细胞迁移检测、常规细胞传代、生产放大(生物反应器)及流式细胞术等。经测试适用于Accutase的细胞系包括：人胚胎干细胞、人间充质干细胞、人神经干细胞，以及巨噬细胞、成纤维细胞、角质形成细胞、血管内皮细胞、肝细胞等原代细胞，和贴壁CHO、BHK、293等建系细胞。
表1.组成信息
| 产品货号 | 产品名称 | 产品规格 | 数量 |
| IMC-014-A | Accutase 细胞消化液 | 50 mL/100mL | 1瓶 |
• 未开封产品于 -20℃ ~ -5℃ 避光保存，有效期24个月。
• 解冻后置于 2~8℃ 避光保存，请勿重新冻存。
• 请勿室温保存。在正确储存条件下，有效期内产品稳定。
• 本品无需使用灭活试剂或含血清培养基，仅通过稀释即可灭活。
一、常规细胞消化(以60 mm培养皿为例)
1. 吸弃培养基，用4 mL DPBS(不含钙镁)洗涤细胞一次。
2. 无菌操作下加入Accutase细胞消化液，60 mm培养皿加2 mL(75 cm²培养瓶加10 mL)。
3. 将培养皿放回37℃培养箱孵育1~10分钟(具体时间依细胞类型而定)。
4. 轻轻拍打培养皿侧壁使细胞脱落，加入适量完全培养基终止消化。
5. 将细胞悬液转移至离心管中，计数后按常规方法传代;无需额外洗涤或添加酶抑制剂。
二、基质胶包被培养皿上hESC的传代消化
1. 当hESC的汇合度达到75%-85%，吸去培养基，用2mL 1×室温PBS(不含Ca2+/Mg2+)清洗hESC，吸去PBS。
2. 加入1mL含Y-27632(10 μM)的室温Accutase，转移到37℃ 5% CO2细胞培养箱中3-5min，使其解离成单细胞。
3. 3-5min后，将干细胞传代培养基以等体积直接加入Accutase中，并使用P-1000吸头轻轻上下吹打细胞，制成单细胞悬液，将单细胞悬液收集到15mL离心管中，室温下200 g离心5 min。
4. 离心结束，充分去除上清，将1 mL预热的hESC/iPSC 完全培养基(含10μM Y-27632)重悬细胞，轻轻地上下移液以确保单细胞溶液均匀。
5. 使用自动细胞计数器计数细胞，使用台盼蓝排除死亡细胞，按2.5 × 105-1× 106个细胞/mL(具体接种数量依细胞类型而定)，接种于低吸附或TC处理6孔板中每孔最终体积为2 mL(含10μM Y-27632)，将孔板转移到37℃、5%CO2细胞培养箱中孵育24 h，再进行后期实验操作。
三、人/大鼠神经球悬浮培养物的消化分离
1. 将神经球细胞悬液从培养皿转移至无菌15 mL离心管中。
2. 让神经球自然沉降到底部(2~5分钟)，或以200 × g离心2分钟。
3. 小心吸弃上清，留约100 μL培养基在管底。
4. 用5 mL DPBS(不含钙镁)重悬神经球，重复步骤2和3。
5. 加入1 mL Accutase细胞消化液至神经球中，室温孵育10分钟。
6. 使用大口径移液枪头轻轻吹打，直至所有神经球分散为单细胞悬液。
7. 加入4 mL新鲜预温的完全培养基，以200 × g离心4分钟。
8. 小心吸弃上清，用1 mL新鲜预温的完全培养基重悬细胞沉淀。
9. 取20 μL计数，用预温完全培养基稀释至2×10⁵ 活细胞/mL，接种至新的60 mm培养皿(5 mL/皿)，于37℃、5% CO₂、饱和湿度下培养。
10. 每2~3天换液一次，神经球直径达3.5 mm时传代。
1. Accutase细胞消化液应在 2~8℃ 过夜解冻，或在室温下轻轻旋转解冻以确保温度均一。请勿在37℃水浴解冻。
2. 解冻后请勿室温长时间放置;请于 2~8℃ 避光保存，请勿重新冻存。
3. 消化时间因细胞类型而异，应根据具体细胞优化消化时间。
4. Accutase不含动物源成分，适用于对动物源成分敏感的应用。
5. 本品仅供科研使用，不可用于诊断或治疗用途。
细胞培养时培养基是否需要预热
细胞培养时培养基需要预热。预热培养基可以减少环境的改变对细胞状态的影响，避免细胞因温度变化而产生应激反应，从而保持细胞的健康状态和生长环境的一致性。可以提前半小时左右，将培养基、PBS和胰酶在37°C下预热，把所需耗材和其他物品放置于超净工作台中紫外照射灭菌。
血清使用前需不需要灭活
一般培养细胞所使用的血清不需要灭活，灭活会导致血清部分营养损失、沉淀增多，灭活的优势(主要是灭活补体以免影响细胞生长)在实际培养过程中对于促进细胞生长并没有太大意义。部分细胞对于生长条件敏感，可以尝试灭活血清培养，但大部分细胞并不需要。
血清融化后有沉淀会影响细胞培养吗
血清沉淀主要是纤维蛋白等蛋白、磷酸盐、脂类等经冻融后析出，导致血清内出现沉淀现象，该现象与血清品质无关，大部分品牌的血清都会有这种情况，不会影响细胞培养，只是培养时可能偶尔观察到血清沉淀，注意区分血清沉淀和细胞污染即可。
细胞为何生长不均匀
细胞传代后放入培养箱没有摇匀，或者放入时摇匀，但在细胞贴壁前，又移动了培养瓶，频繁开关培养箱引起的振动或者培养瓶中培养液过少，培养箱搁板表面不平整，这些因素会导致细胞生长不均匀。
细胞抱团怎么处理
一些悬浮细胞抱团生长是正常现象，大部分悬浮细胞在细胞密度很高的情况下，很可能会出现部分细胞抱团生长的现象，聚团细胞很容易死亡并演化成絮状物，殃及周围的悬浮细胞，因此在培养悬浮细胞时需控制好细胞密度。如果出现了细胞团，可以通过细胞筛去掉部分较大的细胞团，也可以尝试一下方法：将细胞悬液收集到15 ml离心管中，静置20 min左右，小心取上层细胞上清培养(该方法只能去除部分较大的细胞团)。
细胞内有空泡，是否是正常现象
部分细胞本身存在一定的空泡(如HepG2，Ishikawa及一些耐药株等)，这个是正常现象。如果只有少数细胞有内出现极少空泡，则很可能是细胞状态不佳，可以通过调整血清浓度，控制消化，控制传代比例及时间等方法来调整细胞状态;如果大部分细胞出现空泡，且单个细胞内空泡数目偏多，则可能细胞代次较高，细胞老化所致，需更换代次较早的细胞。
细胞传两代后开始逐渐死亡的原因
很可能是培养体系不适合细胞(未使用推荐的培养体系)；或者消化过度，对细胞有严重影响；或者是传代比例不合适(具有密度依赖性的细胞，传代太稀；或者生长较快的细胞，传代较密，细胞严重堆叠生长)。
如何区分活细胞和死细胞
显微镜下观察：活细胞中间透亮，饱满，有光泽，死细胞较暗。也可以通过台盼蓝染色来计算细胞活力。
何用台盼兰计数活细胞
用无血清培养基把细胞悬液稀释到200～2000 个/毫升，在0.1 毫升的细胞悬液中加入0.1 毫升的0.4%的台盼兰溶液。轻轻混匀，用血球计数板计数细胞。活细胞排斥台盼兰，因而染成蓝色的细胞是死细胞，注意计数需在加入台盼蓝10min内完成。有细胞计数仪的，可直接用计数仪进行
何时须更换培养基
视细胞生长密度而定，常规细胞2天更换培养基。
细胞何时进行传代较好
一般情况下细胞生长至完全汇合后就应该传代，所有细胞生长都有一个要求不宜生长过密(也就是常说的长老了)，但有接触抑制的细胞，在汇合前就必须进行传代，这类细胞一般在密度70-80%就进行传代，否则会引起细胞分化。
贴壁细胞总有部分圆形还会有一些漂浮的是正常吗
大部分贴壁细胞培养时都会有一些圆形透亮的细胞存在，也会有一些圆形细胞脱落悬浮的情况存在，这种主要是一些新增殖的细胞或由于局部空间不足被挤出的细胞，只要细胞持续增殖，都会有一些圆形细胞或脱落漂浮细胞，不影响细胞整体增殖和实验，保持正常换液、传代周期即可。细胞具体情况也可以参考细胞库不同细胞照片比对，大部分贴壁细胞都会有圆形细胞、脱落细胞、细胞内颗粒等情况。
细胞内很亮小泡泡是什么东西
一部分情况下细胞内小亮点是细胞内黑色颗粒或者一些粘附在细胞表面的碎片，这种黑点会在调整显微镜焦距时呈小黑点或者小亮点，容易被误认为细胞内小泡，其实只是细胞内部或表面一些物质折光形成的光学现象。也有些是细胞内部脂滴，例如3T3-L1细胞在部分培养条件下可以明显看到内部脂滴，染色后更加清晰。
部分细胞在培养时确实可能会有空泡，可以参考细胞库照片比对。若细胞突然出现细胞内空泡增多现象，通常是细胞受到压力的表现，原因可能是培养基中缺乏谷氨酰胺、添加抗真菌剂、不适当的CO2环境对培养基中碳酸氢钠浓度影响或培养基的营养消耗殆尽。
细胞培养出现小黑点、污染如何防范
可从以下几个方面进行判断： 细胞小黑点如何判断 1、运动性：很多会动的小黑点，只是发生布朗运动的细胞碎片。从运动性上比较，浮躁的细菌活跃的多。 2、培养基的浑浊度：如果在显微镜下无法辨认，那就交给时间吧。细胞培养基对于细菌来说是非常营养的大餐。一旦发生污染，细菌就会大量繁殖。培养基PH值迅速下降，培养基变黄且会变浑浊。通常在12小时内就可以发现，而在48小时内就非常明显。被污染的细胞培养基变黄且浑浊、未被污染的细胞培养基偏红且澄清。 3、接种平板：将怀疑污染物接种在微生物培养平板中，观察菌落形成情况。碎片?细菌?一目了然。
细胞培养形态与ATCC等官网照片有点区别正常吗?
由于每个实验室培养环境、操作方法、培养基及血清品牌批次不同，细胞实际培养形态、状态、生长速度等培养特性均有可能发生改变，甚至显微镜拍摄效果对细胞形态判断都会有有一定影响。因此细胞形态只能作为实验过程中的参考项目，无法作为细胞状态或者类型的判断依据。实际上，细胞在不同细胞库培养的细胞形态都可能存在一定差异。
问：为什么官网的培养条件和我看的文献里细胞培养条件不一样呢？
答：部分细胞是会出现多种培养条件，我们公司优先选择引种来源的培养条件以及建系者所用培养条件，出现差异的原因是不同实验室在保藏过程中更改了细胞的培养条件，为了避免细胞突然更换培养条件后不适应，建议老师使用厂家推荐的培养条件培养。
问：冻存细胞运输与常温细胞运输相比有什么区别？
答：细胞株发货有常温或者冻存两种形式，常温细胞货期一般一周左右，复苏活细胞一个T25瓶发货；冻存细胞有库存的话，一般当天或者隔天可以发货，细胞系冻存细胞担心客户复苏不成功所以赠送了一管，实际发货2管；原代冻存细胞发货1管，冻存细胞发货是10公斤干冰及顺丰运输，所以冻存细胞需额外支付干冰及运输费200元。
问：培养细胞的培养瓶可以重复利用吗？
答：一般不建议重复利用，特别是贴壁不牢固细胞，重复利用会导致吸附性变差，漂浮增多;一个T25瓶建议使用最多不超过3次，其次需要注意无菌操作，避免污染。
问：运输细胞用的培养基可以回收使用吗?
答：不能回收使用的，运输用的培养基(灌液培养基)营养在路上已经消耗得差不多，所以收到细胞之后，培养箱静置4-6h之后，请及时按照说明书细胞培养条件更换新鲜培养液培养。
问：冻存的细胞出现颜色不一致，有的红有的粉，对复苏会有影响吗？
答：这种情况容易在不同冻存批次间出现，与冻存细胞的密度、冻存液配方、温度导致pH变化等有关，偶尔有遇到这种情况，不是绝对性对细胞状态有影响，可以复苏看下。
问：不同引种单位的同一株细胞，RRID都是一样的吗？
答：是的，同一个细胞系只有一个RRID。
1.细胞运输途中遭遇的各种问题，细胞丢失、瓶身破损、培养液严重漏液，细胞未开封，如出现污染状况等，重发
2.细胞免费售后期为一周，一周内细胞培养出现异常及时拍照反馈。超出一周没有任何反馈视为细胞培养正常，后期若出现培养问题不再免费重发
3.申请售后时请提供细胞收货时及反馈售后当天细胞清晰照片及培养信息，若无清晰照片及相应信息，不予免费售后
4.售后仅针对由于细胞自身状态问题导致不可传代的情况，若客户收货一周内已经传代或转移细胞多次，出现死亡或者污染时不予免费售后
5.冻存细胞发货2管，客户先复苏一支，若复苏失败及时联系我方并在我方指导下复苏第二支。若客户未反馈并复苏2管失败，我方将不提供免费售后服务。冻存细胞售后均发复苏培养，若要重发冻存细胞，需补加200元干冰运输费用
6.客户自行冻存细胞一定要注意冻存后复苏一管检查冻存活性，避免冻存死亡导致绝种。我方不对客户冻存细胞死亡负责，客户冻存细胞死亡时不予免费售后
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