RAJI-NLUC-puro人Burkitt’s淋巴瘤细胞尾静脉成瘤验证

· 细胞支原体污染

· 细胞传代次数过多，状态老化

· 培养条件不当(培养基、血清等)

· 荧光素酶表达丢失

· 严格质检：定期进行支原体检测；复苏后传代不超过2个月。

· 稳定筛选：使用含嘌呤霉素的完全培养基进行维持培养，接种前撤药不超过2代。

· 优化培养：使用优质血清和新鲜培养基，保持对数生长期接种。

· 报告基因沉默

· 底物失效或使用不当

· 成像系统参数设置错误

· 功能验证：在接种前，通过体外成像验证细胞的发光信号。

· 底物管理：确保底物储存于-80℃,避免反复冻融，使用前恢复至室温。

· 系统校准：检查活体成像系统是否工作正常。

· 细胞活力不足

· 接种细胞数量过低

· 免疫缺陷小鼠品系选择不当或周龄过大

· 接种操作不当(渗漏、部位不准)

· 活力保证：确保消化时使用温和的胰酶，重悬细胞轻柔，台盼蓝染色检测活力(>90%)。

· 优化数量：对于RAJI这类淋巴瘤细胞，皮下成瘤通常需要5×10⁶~1×10⁷个细胞/只(悬浮细胞需Matrigel等基质胶混合)。

· 模型选择：使用NOD/SCID、NSG、BALB/cnude等免疫缺陷程度高的小鼠，选择6-8周龄年轻小鼠。

· 规范操作：皮下接种时形成明显皮丘，防止细胞液渗出。

2.成瘤潜伏期过长

· 细胞接种量处于临界值

· 小鼠免疫系统仍有残留活性

· 细胞适应性差

· 适当提高接种细胞量。

· 更换免疫缺陷程度更高的品系(如从Nude鼠换为NSG鼠)。

· 可先在小鼠体内传代1次(体内筛选),再取瘤块进行正式实验。

· 信号强，体积小：可能是浸润或转移性生长，无法从外部测量。

· 体积大，信号弱：肿瘤中心坏死导致细胞死亡；或荧光素酶表达沉默。

· 结合多种方法：不能仅凭游标卡尺测量，需结合BLI信号和解剖后观察。

· 分析信号分布：通过成像分析信号是否在肿瘤原位。解剖时取出肿瘤和主要脏器分别成像，确认是否有转移。

· 底物注射时漏液，在腹腔或体表残留。

· 小鼠毛发或皮肤残留荧光素酶底物。

· 小鼠自身生物发光(非常罕见)。

· 规范注射：腹腔注射底物时确保针头进入腹腔，避免皮下注射。

· 清洁动物：成像前用酒精棉片擦拭小鼠腹部和注射部位。

· 设置对照组：注射PBS的荷瘤鼠或未接种细胞的空白鼠，以排除背景。

· 淋巴瘤侵袭性强，可能已发生全身转移(如至肝、脾、中枢神经系统)。

· 肿瘤溃疡或继发感染。

· 密切监测：增加监测频率(体重、体征、行为)。RAJI模型进展可能很快。

· 设定人道终点：明确实验的终止标准(如体重下降超过20%、肿瘤体积>1500mm³、出现瘫痪、严重嗜睡等),并及时执行安乐死。