LLC-FLUC-puro小鼠Lewis肺癌细胞皮下成瘤验证

发布时间：2025-10-24 09:17:22 细胞资源库平台访问量：31

小鼠Lewis肺癌(LLC)细胞系起源于C57BL/6小鼠的自发性肺腺癌，是一种同系移植瘤模型。由于其与宿主C57BL/6小鼠遗传背景完全一致，避免了免疫排斥反应，因此成为研究肺癌生物学行为及治疗策略的经典工具。构建该肺癌模型的重要性在于，它能高度模拟肿瘤在体内的生长、侵袭、转移及肿瘤微环境演变过程，为探究肺癌发病机制、评估新型化疗药物、免疫治疗(如免疫检查点抑制剂)及联合疗法的抗肿瘤效果提供了一个高度可重复且可靠的临床前平台。该模型对加速抗肿瘤药物研发和转化医学研究具有不可或缺的价值。

细胞简介

细胞名称：LLC-FLUC-puro小鼠Lewis肺癌细胞(FLUC标记)

种属来源：小鼠

组织来源：肺

生长特性：半贴壁生长

细胞形态：上皮细胞样

背景介绍：Luciferase LLC细胞稳定表达萤火虫荧光素酶。可用作萤火虫荧光素酶活性检测中的阳性对照，也可用于活体动物成像实验。该细胞通过慢病毒转染的方式携带Luc基因。其亲本株是于1951年由Margaret R. Lewis和Leonard J. Lewis从一只C57BL/6小鼠的自发性肺腺癌中建立。其最重要的背景特征在于它与C57BL/6小鼠的遗传背景完全一致，这意味着将LLC细胞移植到同品系的受体小鼠体内时，不会引发免疫排斥反应，从而能够成功模拟免疫系统功能健全机体内的肿瘤生长、侵袭和转移过程。该细胞株具有高度的侵袭性和自发性转移倾向，尤其易向肺部转移，因此被广泛用于研究实体瘤的增殖、血管生成、转移机制以及评估各类抗癌药物(尤其是化疗药和免疫治疗剂)的疗效，为临床前药物研发提供了至关重要的实验平台。

puro药筛浓度：LLC-FLUC-puro细胞puro药筛浓度为1.0ug/ml，培养过程中建议使用0.5ug/ml puro维持

培养须知：首次复苏或长期未用嘌呤霉素时，建议用含嘌呤霉素的培养基培养24-48小时以清除非抗性细胞。建议定期备份低代次细胞，并记录荧光素酶活性数据以确保实验一致性。如有特殊需求(如无血清培养)，需逐步驯化并验证基因稳定性。双标记(FLUC+Puro)确保长期基因稳定性，但需持续筛选压力。

LLC-FLUC-puro细胞系不同接种方式成瘤特性(仅供参考)

接种途径	接种细胞量	宿主小鼠品系	成瘤率	成瘤时间	转移特性	主要应用领域
皮下注射	1×10⁵-1×10⁶	C57BL/6	~100%	5-7天可触及	自发性肺转移	原发性肿瘤生长、药物疗效评估、免疫治疗
尾静脉注射	2×10⁵-5×10⁵	C57BL/6	N/A	2-3周可见BLI信号	实验性肺转移	肿瘤转移、定植、抗转移药物筛选
原位注射(肺)	1×10⁵-2.5×10⁵	C57BL/6	~100%	1-2周BLI信号	局部侵袭及转移	模拟肺癌病理进程、微环境研究

同类细胞系成瘤差异(仅供参考)

产品货号	细胞系	物种/品系	组织学类型	模型免疫类型	转移倾向	报告基因	主要优点	主要缺点
IML-036	LLC-FLUC-puro	小鼠/C57BL/6	鳞癌	免疫健全(同系)	高(自发肺转)	有(Luc)	免疫系统完整，可实时成像，高转移	鼠源，与人肿瘤存在差异
IM-M060	亲本LLC	小鼠/C57BL/6	鳞癌	免疫健全(同系)	高(自发肺转)	无	免疫系统完整，经典高转移模型	无法实时动态监测
IML-023/IML-113	A549-FLUC-bsd/A549-FLUC-puro	人	肺腺癌	免疫缺陷(裸鼠、NSG)	低(需强制转)	有/无	人源细胞，研究人肿瘤生物学	缺乏免疫环境，转移能力弱
IML-132	NCI-H460-FLUC-puro	人	大细胞肺癌	免疫缺陷(裸鼠、NSG)	中(自发转)	有/无	人源细胞，生长快，有一定转移性	缺乏免疫环境

LLC-FLUC-puro成瘤关键影响因素

影响因素类别	具体因素	对成瘤的影响	优化策略
细胞状态与质量	细胞代数	高代次细胞可能发生遗传漂变，导致成瘤性、转移能力和荧光素酶表达减弱或丧失。	使用低代次细胞(通常推荐冻存后复苏传代不超过10-15代)。建立主细胞库和工作细胞库，避免长期连续传代。
	细胞活力	低活力(<80%)会导致初期大量细胞死亡，成瘤延迟甚至失败，炎症反应干扰模型。	复苏或消化后确保细胞活力>90%。台盼蓝染色计数确认。优化消化流程，避免过度消化。
	报告基因稳定性	未使用抗生素压力筛选，会导致荧光素酶表达丢失，体内成像信号减弱或消失。	在常规培养时，在培养基中加入Puromycin(嘌呤霉素，浓度需预实验确定，通常0.5-2μg/mL)进行持续筛选，维持质粒稳定性。
	支原体污染	严重抑制细胞生长和活力，干扰体内肿瘤形成，并引起非特异性免疫反应，破坏实验。	定期进行支原体检测(如PCR法)。从权威机构购买细胞，操作规范。一旦污染，果断弃用。
宿主与准备	小鼠品系	LLC细胞源于C57BL/6小鼠，免疫健全的同系小鼠是成瘤前提，否则会发生免疫排斥。	必须使用C57BL/6小鼠(雌雄根据实验设计选择，通常6-8周龄)。使用免疫缺陷鼠会导致排斥。
	小鼠年龄与体重	年龄过大(>12周)或体重过重的小鼠免疫力更强，可能导致成瘤延迟或生长变慢。	使用6-8周龄，体重18-22g的健康青年小鼠。同一批实验中小鼠年龄体重应尽量一致。
	Matrigel基质胶	显著提高成瘤率和成瘤速度。提供细胞外基质支撑，模拟微环境。	在接种时，将细胞重悬于PBS与Matrigel的1:1混合液中(冰上操作，防止凝固)。
操作技术	接种细胞量	过低：成瘤率低，成瘤时间长，不均一。过高：肿瘤生长过快，可能过早坏死，影响治疗窗口期。	进行预实验确定最佳接种量。皮下接种常用范围：5×10⁵~1×10°cells/mouse。根据实验目的(快/慢速生长)调整
	接种体积	过大：可能导致细胞泄漏或聚集不佳。过小：注射难度大，浓度过高，细胞易死亡。	皮下注射：通常100μL/部位。尾静脉：100-200μL。原位：30-50μL。
	接种操作	皮下：注射过深(入肌肉)或过浅(皮内)影响生长。尾静脉：失败导致细胞团块栓塞，动物死亡。	皮下：针头平行进入，形成鼓包。尾静脉：充分预热小鼠舒张血管，熟练操作。原位：由经验丰富的人员操作，严格无菌。
	细胞悬液状态	接种前细胞在室温放置过久、重悬不均、反复吹打，会导致细胞团块、活力下降。	细胞消化后充分吹打成单细胞悬液，冰上保存，并在1小时内完成接种操作。
实验设计与环境	分组随机性	如果不随机分组，可能会将体质强/弱的小鼠集中在一组，引入偏差。	在接种前，根据体重将所有小鼠完全随机分配到各实验组。
实验设计与环境	饲养环境	拥挤、不洁、营养不良或应激(噪音、频繁打扰)会影响小鼠免疫状态，干扰肿瘤生长。	提供SPF级标准提供SPF级标准饲养环境，充足的食物和水，每组笼养只数不宜过多，减少不必要的打扰。