RAW 264.7小鼠巨噬细胞分化如何处理

RAW 264.7细胞培养过程中密度过大，培养基颜色发黄都易刺激细胞分化，分化的RA264.7细胞呈多角形，体积明显增大，时常有较长的黑色触角，那么RAW 264.7细胞如何避免分化及分化该处理呢?

RAW 264.7小鼠巨噬细胞背景简介

RAW 264.7细胞是从Abelson小鼠白血病病毒(MuLV)诱导的肿瘤中建立的雄性小鼠巨噬细胞细胞系，Raschke等人于1976年首次报道了该细胞系。RAW 264.7细胞sIg-、Ia-抗原、Thy-1.2表面抗原阴性。RAW 264.7细胞不分泌可检测到的病毒颗粒，XC斑点形成试验阴性。根据Janet W.Hartley博士在2008年发表的一项研究，RAW 264.7细胞被证明表达生态性和多向性MuLV，并且使用XC噬斑试验对病毒复制呈阳性。RAW 264.7细胞可以胞饮中性红并吞噬乳胶颗粒与酵母聚糖，并且可以抗体依赖性地分解绵羊红血球与肿瘤靶细胞。LPS或PPD处理2天可诱导RAW 264.7细胞分解红血球，但对肿瘤靶细胞无作用。RAW 264.7细胞易于繁殖，DNA转染效率高，对RNA干扰敏感，并支持小鼠诺如病毒的复制，可以用于3D细胞培养、免疫系统紊乱和免疫学研究，也是一种合适的转染宿主。

RAW 264.7小鼠巨噬细胞分化如何处理

一、RAW 264.7细胞如何避免细胞分化

RAW 264.7细胞消化时不能用胰酶消化，消化会造成细胞分化，客户可以用移液枪吹打，会比巴氏吸管方便一点。

二、RAW 264.7细胞分化处理

前面我们说到RAW 264.7不能用胰酶消化，许多实验室用细胞刮传代，这是一种非常经典好用的方法。在这边我们推荐“吹打传代”方法，其操作步骤简单，也能更好地控制细胞分化率。

(一)吹打传代操作步骤

1.轻拍几下培养皿

2.用1ml 的枪或者巴氏管把细胞吹下来

3.细胞吹下来后转移到15ml离心管

4.1200rpm(约250g) 离心3min

5.去上清，用新鲜培养基重悬细胞

6.按比例接种到新的培养皿中

(二)吹打传代时机

1.当细胞密度较低的时候，可能不太好吹下来。

2.当细胞密度达到80%~90%的时候，最容易吹下。

(三)操作注意事项

1.RAW 264.7细胞三天不传代更容易分化，很难吹下，每一次接种密度都要控制好；

2.分化的细胞贴壁牢固，传代的时候请勿强制性吹下这些细胞，只接种容易吹下的那些未分化细胞；

3.吹打的力度一定要轻，切勿暴力吹打；

4.细胞的贴壁性和培养器皿的材料也有关，有时RAW 264.7 会出现太容易吹下的情况，连分化细胞都贴壁较松，此时更适宜用巴氏管吹打；

5.存在少量分化细胞，培养时，无法保证100% 不分化，通过传代可以将分化比例控制在一定范围。RAW264.7细胞形态主要为圆形。因其对环境非常敏感，在培养时会出现少量短梭形或多角形的分化细胞，这是正常现象。分化的细胞贴壁牢固，而未分化的细胞贴壁松散。根据贴壁松紧差异，可将未分化的细胞吹下，并转移至新的培养器皿中进行培养。

6. 对胰酶敏感。RAW264.7细胞对胰蛋白酶敏感，接触胰酶后将很快发生自发分化，贴壁变紧，很难消化下来。所以不建议用胰酶对该细胞进行传代。

7. 生长较快RAW264.7细胞生长速度较快，建议每天观察细胞密度，当细胞密度到达80%时及时进行传代，以防细胞过度生长状态变差。