DPC-X1，壶腹癌研究的 “中国模型” 上线

为应对消化道肿瘤在临床治疗中面临的高侵袭性、易转移与化疗耐药等共同挑战，推动更具针对性的基础研究与药物开发，建立并系统表征了一系列源自原发肿瘤的细胞系。该系列模型涵盖多种高发及罕见癌种，包括胰腺导管腺癌(PDAC-X1, PDAC-X2, PDAC-X3)、肝细胞癌(Hep-X1)、壶腹癌(DPC-X1)、肝内胆管癌(ICC-X1, ICC-X2, ICC-X3)、胆囊癌(GBC-X1)以及联合肝细胞-胆管癌(CHC-X1)。这些细胞系不仅在体外表现出稳定的增殖能力，更能在体内高效成瘤，其病理特征、分子表型(如特定基因突变)以及组织学结构均与临床原发肿瘤高度相似，确保了模型优异的临床相关性。

作为宝贵的临床前研究工具，该系列细胞系为深入探索肿瘤发生发展机制、侵袭转移规律、耐药分子基础提供了核心平台。同时，它们也是筛选抗癌药物、验证新型疗法、以及开展个体化精准治疗研究的理想实验模型。本系列细胞系的成功构建，填补了特定癌种(如混合型壶腹癌)模型的空白，为全面揭示中国人消化道肿瘤的生物学特性、研发新的诊断与治疗策略奠定了坚实的资源基础。

基本信息

英文标题：Establishment and characterization of a new human ampullary carcinoma cell line, DPC-X1

中文标题：一种新型人类壶腹癌细胞系 DPC-X1 的建立与表征

发表期刊：《World Journal of Gastroenterology》

影响因子：5.4

作者单位：

1. The Forth Department of General Surgery, The First Hospital of Lanzhou University, Lanzhou 730000, Gansu Province, China.

2. State Key Laboratory of Veterinary Etiological Biology, Key Laboratory of Animal Virology of the Ministry of Agriculture, Lanzhou Veterinary Research Institute, Chinese Academy of Agricultural Sciences, Lanzhou 730000, Gansu Province, China.

3. The Second Clinical Medical College, Lanzhou University, Lanzhou 730000, Gansu Province, China

4. Department of General Surgery, The Second Hospital of Lanzhou University, Lanzhou 730000, Gansu Province, China

作者信息：

Hao Xu, Chang-Peng Chai, Xin Miao, Huan Tang, Jin-Jing Hu, Hui Zhang, Wen-Ce ZhouCorresponding author: Hao Xu, E-mail: amoyxu@126.com

研究背景

壶腹癌是罕见的胃肠道肿瘤，占壶腹周围癌的 20%，现有报道的壶腹癌细胞系仅 8 个，且无混合型亚型和中国人群来源的细胞系，限制了其发病机制和治疗策略研究。壶腹癌分为肠型、胰胆型和混合型，混合型相关研究因缺乏模型而滞后。本研究从中国壶腹癌患者的原发肿瘤组织中建立稳定的混合型壶腹癌细胞系 DPC-X1，系统表征其生物学特性，为壶腹癌研究提供新工具。

研究方法

从 60 岁中国男性壶腹癌患者(CA199>1000 U/mL，中低分化)的手术标本中分离肿瘤组织，经胶原酶 II 和中性蛋白酶消化后，用含 10% FBS 的 RPMI-1640 培养基原代培养，差速消化去除成纤维细胞，传代 5 代后按 1:2 比例传代并冻存;通过 CCK-8 法绘制生长曲线、STR 分型验证同源性、核型分析检测染色体特征、类器官培养评估干性、透射电镜观察超微结构;采用 CCK-8 法检测对奥沙利铂、紫杉醇、5 - 氟尿嘧啶、吉西他滨的药敏性;将 1×10⁶个 P45 代细胞皮下接种 BALB/c 裸鼠，监测成瘤率和肿瘤生长;通过 HE 染色和免疫组化检测 CK7、CK20、CKL、Ki67、CEA 的表达，验证细胞系特性。

实验结果

图1：患者临床资料与 DPC-X1 细胞形态

该图呈现细胞系来源与基础形态：患者术前 CA199>1000 U/mL，MRI 提示壶腹癌，手术标本为壶腹周围灰白色肿瘤(图 1A-D);原代 DPC-X1 细胞可见多核细胞和巨核细胞(图 1F)，传至第 80 代仍保持稳定的上皮样形态，呈簇状片状生长(图 1G)，无形态变异。

图2：DPC-X1 的生长曲线、STR 检测、核型分析及类器官培养

该图验证细胞系稳定性与遗传特征：①生长曲线显示细胞倍增时间为 48h，增殖稳定(图 2A);②STR 分型显示 DPC-X1 与原发肿瘤的似然比达 4.1867×10²⁰，无其他细胞系污染，确认为新型细胞系(图 2B);③核型分析为亚四倍体，代表性核型为 80, XX del (2)(q32) del (5)(p12) del (6)(q24) inv (9) del (10) p (13) del (17) p (12)(图 2C);④类器官培养 1 周形成球形或囊性结构，2 周呈孢子样或分支样，干性特征显著(图 2D-E)。

图3：DPC-X1 的透射电镜超微结构

该图揭示细胞超微特征：细胞核大且畸形、核仁聚集于核膜，胞质稀少;细胞表面可见微绒毛和伪足(图 3A)，胞内富含内质网和核糖体(图 3B)，高尔基体发达、线粒体大小形态不一(图 3C)，细胞间存在桥粒结构(图 3D)，符合恶性肿瘤细胞的超微特征。

图4：DPC-X1 的药敏试验

该图明确药敏特征：DPC-X1 对奥沙利铂(IC₅₀=13.26μmol/L)和紫杉醇(IC₅₀=0.014μmol/L)敏感，对 5 - 氟尿嘧啶(IC₅₀=144.9μmol/L)和吉西他滨(IC₅₀>600μmol/L)耐药，为临床化疗方案选择提供参考(图 4A-D)。

图5：DPC-X1 的裸鼠成瘤实验

该图验证体内成瘤能力：3 只 BALB/c 裸鼠接种后 4 周均形成皮下肿瘤，成瘤率 100%，肿瘤呈侵袭性生长，表面可见新生血管(图 5A-C);解剖未发现肝肺转移(图 5D)，肿瘤生长曲线显示增殖迅速，小鼠体重无显著变化(图 5E-F)，证实细胞系体内成瘤稳定且无明显毒性相关影响。

图6：DPC-X1 的 HE 染色与免疫组化特征

该图确认病理与分子一致性：① HE 染色显示 DPC-X1 细胞、类器官、移植瘤及原发肿瘤均呈中低分化，细胞异形性显著，可见多核巨细胞(图 6A-D);② 免疫组化显示四者均强表达 CK7、CK20、CKL(兼具肠型和胰胆型特征，证实为混合型壶腹癌)，Ki67 阳性率 50%(增殖活跃)，CEA 局灶表达(图 6E-X)，与原发肿瘤表型高度一致。

研究结论

本研究成功从中国壶腹癌患者原发肿瘤中建立首个混合型壶腹癌细胞系 DPC-X1，该细胞系稳定传代 80 余代，倍增时间 48h，STR 分型与原发肿瘤同源，核型为亚四倍体，具备类器官形成能力和典型恶性肿瘤超微结构;体内成瘤率 100%，移植瘤病理与原发肿瘤一致;药敏试验明确其对奥沙利铂、紫杉醇敏感，对 5 - 氟尿嘧啶、吉西他滨耐药;免疫组化证实其兼具肠型和胰胆型分子特征，填补了混合型壶腹癌细胞系及中国人群来源壶腹癌模型的空白，为壶腹癌的发病机制研究、耐药机制探索及新药筛选提供了理想工具。