豨莶草活性成分 Kirenol 抗类风湿关节炎有新机制！靶向 TWEAK/Fn14 通路，抑制炎症还调节免疫

类风湿关节炎(RA)是一种以滑膜炎症、关节破坏为特征的慢性自身免疫病，滑膜成纤维细胞(FLSs)的异常增殖和炎症因子释放是其核心病理机制。Kirenol(奇壬醇)作为中药豨莶草的主要活性成分，已被证实具有抗炎抗风湿作用，但其具体分子机制尚不明确。在此背景下，来自福建中医药大学药学院的 Lihong Nan 和 Yaping Chen 团队在《International Journal of Molecular Medicine》(2025, 56:145)发表研究，首次证实 Kirenol 通过靶向肿瘤坏死因子样弱凋亡诱导因子(TWEAK)/ 成纤维细胞生长因子诱导即刻早期反应蛋白 14(Fn14)通路，抑制 FLSs 异常增殖迁移、调节免疫平衡，从而缓解胶原诱导关节炎(CIA)大鼠的关节损伤，为 RA 的天然药物治疗提供了新机制和实验依据。

本研究旨在探究 Kirenol 治疗类风湿关节炎(RA)的作用及分子机制。通过建立 CIA 大鼠模型，采用苏木精 - 伊红染色、免疫组化等检测 Kirenol 对关节病理、炎症因子的影响;利用 TGF-β1 诱导的人 RA 滑膜成纤维细胞(MH7A)，通过 CCK-8、划痕实验等评估其对细胞增殖迁移的作用;结合表面等离子体共振(SPR)、Western blot 等验证 Kirenol 与 TWEAK/Fn14 通路的关联。结果显示，Kirenol 可减轻 CIA 大鼠关节炎症，抑制 FLSs 异常，其作用依赖于抑制 TWEAK/Fn14 通路及下游 NF-κB 激活，为 Kirenol 的临床应用提供了机制支持。

研究背景

类风湿关节炎(RA)的核心病理特征包括滑膜增生、炎症细胞浸润及关节软骨破坏，滑膜成纤维细胞(FLSs)的过度增殖和活化是关键驱动因素 ——FLSs 可分泌炎症因子(如 MCP-1、IL-17)和基质金属蛋白酶(如 MMP-13)，加剧炎症和组织损伤。

TWEAK/Fn14 通路是 RA 发病的重要信号轴：TWEAK 与受体 Fn14 结合后，通过招募 TRAF2 激活下游非经典 NF-κB 通路(p52/RelB)，促进 FLSs 增殖、炎症因子释放及免疫失衡(如 Th17/Treg 比例升高)。

Kirenol 作为豨莶草的活性成分，已被报道具有抗炎、调节免疫的作用，但其是否通过调控 TWEAK/Fn14 通路发挥抗 RA 作用尚未明确。本研究聚焦这一通路，旨在明确其是否通过靶向该通路发挥抗 RA 作用，为天然药物治疗 RA 提供理论依据。

实验结果

图 1：Kirenol 改善 CIA 大鼠关节病理损伤

该图展示 Kirenol 对 CIA 大鼠的体内治疗效果：与对照组相比，CIA 组大鼠关节炎指数(AI)和足爪水肿显著升高，血清类风湿因子(RF)水平增加;Kirenol(1.25、2.5、5 mg/kg)处理后，AI 和足爪水肿从第 7 天起显著降低(P<0.05 或 P<0.01)，RF 水平也显著下降(P<0.01)。组织学显示，CIA 组滑膜增生、炎症细胞浸润及软骨破坏明显，Kirenol 可减轻这些病理改变，且 5 mg/kg 剂量效果接近阳性药泼尼松(Pre)。

图 2：Kirenol 抑制 CIA 大鼠滑膜炎症因子表达

该图评估 Kirenol 对炎症因子的调控：免疫组化显示，CIA 大鼠滑膜中 MCP-1、ICAM-1、MMP-13 表达显著升高(P<0.01);Kirenol 处理可剂量依赖性降低三者表达(P<0.05 或 P<0.01)。Western blot 证实，CIA 组 CXCL-10 和 CXCR3 蛋白上调，Kirenol 可显著下调其表达(P<0.05 或 P<0.01)，提示其可抑制炎症趋化因子通路。

图 3：Kirenol 调节 CIA 大鼠 Th17/Treg 平衡

该图分析 Kirenol 对免疫细胞的影响：流式细胞术显示，CIA 组外周血 Th17 细胞比例及 Th17/Treg 比值升高，Treg 细胞比例降低;Kirenol 处理可降低 Th17 细胞比例和 Th17/Treg 比值(P<0.05 或 P<0.01)，升高 Treg 细胞比例(P<0.05)。ELISA 证实，Kirenol 减少血清 IL-17(促炎)、增加 IL-10(抗炎)水平(P<0.05 或 P<0.01)，提示其可改善免疫失衡。

图 4：Kirenol 抑制 TGF-β1 诱导的 MH7A 细胞增殖迁移

该图验证 Kirenol 对 FLSs 的体外作用：CCK-8 实验显示，5-80 μM Kirenol 对 MH7A 细胞活力无显著影响;TGF-β1 诱导后细胞增殖率升高，5 μM Kirenol 可显著抑制其增殖(P<0.05)。划痕实验显示，TGF-β1 增强细胞迁移能力，Kirenol(2.5、5、10 μM)可剂量依赖性降低迁移率(P<0.01)，效果与 Pre 相当。

图 5：Kirenol 与 Fn14 的特异性结合

该图通过 SPR 验证分子相互作用：Kirenol 与 Fn14 蛋白的结合呈浓度依赖性，传感器 gram 显示响应值随浓度升高而增加，解离常数(Kd)为 1.2 μM，证实 Kirenol 可直接结合 Fn14，为其靶向作用提供分子证据。

图 6：Fn14 过表达逆转 Kirenol 对 MH7A 细胞的抑制作用

该图探究 Fn14 的介导作用：慢病毒转染使 MH7A 细胞 Fn14 过表达后，Kirenol 对 TGF-β1 诱导的细胞增殖(CCK-8)和迁移(划痕实验)的抑制作用被显著逆转(P<0.05)。ELISA 显示，Kirenol 降低的 MCP-1、ICAM-1、MMP-13、CXCL-10 水平在 Fn14 过表达后回升(P<0.05)，提示 Kirenol 的作用依赖 Fn14。

图 7：Kirenol 抑制 CIA 大鼠 TWEAK/Fn14 通路激活

该图分析体内通路变化：Western blot 显示，CIA 大鼠滑膜中 TWEAK、Fn14、TRAF2、ASK1、NIK 蛋白表达升高，IRE1、IKKα、p100 磷酸化水平增加(P<0.01);Kirenol 处理可剂量依赖性下调上述分子表达及磷酸化(P<0.05 或 P<0.01)。免疫荧光证实，CIA 组核内 p52 和 RelB(非经典 NF-κB 亚基)阳性细胞增多，Kirenol 可减少其核定位(P<0.05 或 P<0.01)。

图 8：Kirenol 在体外抑制 TWEAK/Fn14-NF-κB 通路

该图验证体外通路调控：TGF-β1 诱导的 MH7A 细胞中，TWEAK、Fn14 表达及 IKKα、p100 磷酸化升高，核内 p52、RelB 增加(P<0.05);5 μM Kirenol 可显著抑制这些变化(P<0.05)，而 Fn14 过表达可逆转其抑制作用(P<0.05)，进一步证实 Kirenol 通过 Fn14 调控通路。

图 9：Kirenol 下调 CIA 大鼠滑膜组织中 TWEAK/Fn14 通路相关蛋白

该图通过 Western blot 分析通路关键分子的表达：与对照组相比，CIA 大鼠滑膜中 TWEAK、Fn14、TRAF2、ASK1、NIK 蛋白表达显著升高(P<0.01)，IRE1、IKKα、p100 的磷酸化水平也显著增加(P<0.01);Kirenol(1.25、2.5、5 mg/kg)处理可剂量依赖性降低上述蛋白的表达及磷酸化(P<0.05 或 P<0.01)，表明其可抑制 TWEAK/Fn14 通路的激活及其下游信号传导。

图 10：Kirenol 减少 CIA 大鼠滑膜细胞中 p52 和 RelB 的核定位

该图通过免疫荧光检测非经典 NF-κB 亚基的核转运：CIA 组滑膜细胞中核内 p52 和 RelB 阳性细胞数量显著增多(P<0.01);Kirenol 处理后，核内 p52 和 RelB 阳性细胞比例显著降低(P<0.05 或 P<0.01)，提示其可抑制 p52/RelB 异二聚体进入细胞核启动下游基因转录。

图 11：Fn14 过表达阻断 Kirenol 对 TWEAK/Fn14 通路的抑制作用

该图在体外验证 Fn14 的介导作用：TGF-β1 诱导的 MH7A 细胞中，Kirenol(5 μM)可下调 TWEAK、Fn14 蛋白表达，抑制 IKKα、p100 磷酸化及核内 p52、RelB 表达(P<0.05);而 Fn14 过表达后，上述抑制作用被显著逆转(P<0.05)，直接证实 Kirenol 通过靶向 Fn14 调控通路活性。

图 12：Kirenol 缓解 RA 的机制示意图

该图概括核心机制：RA 状态下，TWEAK/Fn14 通路激活，通过 TRAF2-IRE1-ASK1-NIK 信号轴促进 IKKα 磷酸化，诱导 p100 加工为 p52，形成 p52/RelB 复合体入核，启动炎症因子(如 MCP-1)、MMP-13 及 Th17 分化相关基因的表达，导致滑膜增生、炎症浸润及软骨损伤;Kirenol 通过直接结合 Fn14，抑制该通路激活，从而减轻 RA 病理损伤。

研究结论

本研究证实，Kirenol 通过靶向 TWEAK/Fn14 通路发挥抗类风湿关节炎作用：在 CIA 大鼠模型中，Kirenol 可减轻关节炎症和软骨损伤，降低 RF 及炎症因子(MCP-1、MMP-13 等)水平，调节 Th17/Treg 平衡;在体外，其可抑制 TGF-β1 诱导的 FLSs 异常增殖迁移。机制上，Kirenol 直接结合 Fn14，抑制 TWEAK/Fn14 通路下游 TRAF2-ASK1-NIK 信号及非经典 NF-κB(p52/RelB)激活，且 Fn14 过表达可逆转其作用。Kirenol 安全性良好，为 RA 的天然药物治疗提供了新靶点和实验依据。