达沙替尼通过改变免疫细胞谱系抑制多种小鼠实体瘤模型的肿瘤生长

同源异体小鼠肿瘤模型是免疫肿瘤学(I/O)研究中不可或缺的临床前模型，但它们对免疫检查点抑制剂(ICIs)的反应有限，这可能是由于它们的固有低免疫原性。为了解决这一问题，研究人员通过将鸡卵清蛋白(OVA)这一高度免疫原性的蛋白质表达到同源异体肿瘤细胞中，开发了新的免疫原性同源异体模型。这些模型，如DC2.4-OVA和B16-OVA，显示出比它们的亲本细胞系更慢的肿瘤生长速度，这可能是由于免疫介导的排斥反应。更重要的是，这些OVA表达的模型对ICIs，特别是抗PD-1治疗，表现出更高的敏感性，这表明它们在增强T细胞介导的免疫反应方面具有潜力。此外，通过过继T细胞转移实验，研究人员验证了这些模型中存在肿瘤特异性记忆T细胞。这些结果表明，OVA工具细胞不仅增强了对ICIs的反应，而且为临床前免疫治疗评估提供了新的、具有更高免疫原性的同源异体模型，这对于I/O研究具有重要的意义。

基本信息

英文标题：Dasatinib changes immune cell profiles concomitant with reduced tumor growth in several murine solid tumor models

中文标题：达沙替尼通过改变免疫细胞谱系抑制多种小鼠实体瘤模型的肿瘤生长

发表期刊：《Cancer Immunology Research》

影响因子：10.2

作者单位：

1. Hematology Research Unit Helsinki, Department of Hematology, University of Helsinki and Helsinki University Hospital Comprehensive Cancer Center, Helsinki, Finland

2. Bristol-Myers Squibb Research and Development, Princeton,NJ

3. Cancer Gene Therapy Group, Department of Pathology and Transplantation Laboratory, Haartman Institute, University of Helsinki, Finland

作者信息：Can Hekim, Mette Ilander, Jun Yan

研究背景

癌症通过免疫编辑逃避免疫监视是治疗难点。达沙替尼是一种广谱酪氨酸激酶抑制剂(TKI)，临床用于白血病治疗，但其在实体瘤中的免疫调节作用尚不明确。既往研究表明，达沙替尼可快速动员淋巴细胞并激活NK细胞，但体外实验显示其可能抑制T细胞功能。本研究旨在探索达沙替尼在多种实体瘤模型(黑色素瘤、肉瘤、结肠癌、乳腺癌)中的抗肿瘤效果及免疫机制，重点关注其对肿瘤微环境中免疫细胞(如CD8+ T细胞、调节性T细胞)的影响，以验证其作为免疫调节剂的潜力。

研究方法

研究采用四种同源小鼠实体瘤模型(B16.OVA黑色素瘤、1956肉瘤、MC38结肠癌、4T1乳腺癌)，通过皮下或原位接种建立肿瘤。达沙替尼(30 mg/kg/天)或对照通过灌胃给药，监测肿瘤体积及免疫表型变化。体外实验通过MTS法和集落形成实验评估达沙替尼对肿瘤细胞的直接毒性。免疫分析包括流式细胞术检测外周血及肿瘤浸润淋巴细胞(TILs)、CyTOF质谱流式技术解析肿瘤免疫微环境，并通过抗体耗竭实验验证T/NK细胞在抗肿瘤中的作用。组织学分析采用免疫组化(CD8染色)评估T细胞浸润。

实验结果

图1：达沙替尼诱导小鼠淋巴细胞快速动员

通过不同剂量达沙替尼处理小鼠，发现其剂量依赖性增加外周血白细胞(WBC)及淋巴细胞比例(最高达5.3倍)。肿瘤模型小鼠中，达沙替尼显著提升淋巴细胞比例(5.17倍 vs 对照2.16倍)，单核细胞和中性粒细胞仅呈趋势性增加。结果提示达沙替尼通过快速动员淋巴细胞增强抗肿瘤免疫应答，但个体差异较大，可能与药物代谢或肿瘤异质性相关。

图2：达沙替尼对肿瘤细胞的体外作用

体外实验显示，达沙替尼对B16.OVA黑色素瘤细胞无直接毒性(100 nM时存活率90%)，而K562白血病细胞在100 nM时几乎完全死亡。三维集落形成实验进一步证实达沙替尼不影响黑色素瘤细胞增殖。此结果排除了药物直接杀伤肿瘤的可能性，提示体内抗肿瘤效应依赖免疫系统。

图3：达沙替尼改变外周免疫细胞组成

流式分析显示，达沙替尼治疗组小鼠外周血CD8+ T细胞比例升高(16.6% vs 13.2%)，CD4/CD8比值降低(1.39 vs 1.52)。CTLA-4在CD8+ T细胞的表达增幅较小(5.7% vs 9%)，NK细胞比例及脱颗粒功能(CD107a+)增强。表明达沙替尼通过调节T细胞亚群平衡及NK活性增强抗肿瘤免疫。

图4：肿瘤浸润CD8+ T细胞增加及功能验证

免疫组化显示达沙替尼组肿瘤内CD8+ T细胞数量显著增加(中位数17 vs 4个/视野)。流式检测发现肿瘤内CD8+ T细胞高表达PD-1(80% vs 外周<5%)，提示其处于激活但可能耗竭状态。T/NK细胞耗竭实验证实，达沙替尼的抗肿瘤作用完全依赖功能性淋巴细胞。

图5：多实体瘤模型的抗肿瘤验证

在肉瘤(1956)、结肠癌(MC38)及乳腺癌(4T1)模型中，达沙替尼显著抑制肿瘤生长(p<0.001)。体外实验显示达沙替尼仅在高浓度(500 nM)时对部分肿瘤细胞有微弱毒性，进一步支持其免疫依赖性机制。原位乳腺癌模型结果与皮下模型一致，验证结论普适性。

图6：CyTOF解析肿瘤免疫微环境

质谱流式分析显示，达沙替尼治疗组肿瘤内CD4+ T细胞比例下降(p<0.05)，FoxP3+ Treg显著减少(所有模型均一致)。肉瘤和结肠癌模型中单核细胞比例增加，可能参与抗肿瘤免疫重塑。数据揭示达沙替尼通过抑制Treg打破免疫抑制，协同增强效应T细胞功能。

研究结论

达沙替尼在无直接细胞毒性的情况下，显著抑制多种实体瘤生长，其机制与免疫调节相关：

1. 外周免疫：增加CD8+ T细胞比例，降低CD4/CD8比值，增强NK细胞脱颗粒能力。

2. 肿瘤微环境：促进CD8+ T细胞浸润，减少调节性T细胞(Treg)，重塑免疫抑制状态。

3. 依赖性验证：T/NK细胞耗竭后抗肿瘤效应消失，证实免疫系统介导作用。

研究支持达沙替尼作为免疫调节剂联合其他疗法(如PD-1抑制剂)的潜力，为实体瘤免疫治疗提供新策略。