人真皮成纤维细胞分离试剂盒

产品描述

皮肤指身体表面包在肌肉外面的组织，是人体最大的器官，主要承担着保护身体、排汗、感觉冷热和压力等功能。皮肤由表皮、真皮和皮下组织构成。成纤维细胞属于由中胚层分化而来的间质细胞。由于这些细胞非常容易培养，已被广泛用于细胞和分子生物学研究。成纤维细胞能够分泌I型和III型胶原等细胞外基质，并且不同器官中的成纤维细胞有显著的不同。伤口修复时，真皮成纤维细胞由可增殖，可迁移的表型变为有收缩性的，可重塑基质的表型，同时，会分泌大量的透明质酸应对修复时的炎症反应。

适用范围

该试剂盒适用于人皮肤组织成纤维细胞提取试剂盒。

规格

本试剂盒规格为10次(以1块1cm³为1次计)

运输和存储条件

2-8 ℃保存与运输，保质期为参考下表。所有组分开封后，有效期为 6-8 周，建议尽快使用。

配套培养基信息

表1. 分离培养试剂盒组成信息

分离步骤

实验前准备：人皮肤组织专用消化液I、II、组织处理缓冲液、人皮肤成纤维细胞专用培养基;实验需自备手术器械、6cm/10cm培养皿、离心管若干。

1. 在手术室中将组织置于预冷至4℃、含0.5%双抗的组织保存液中，保证组织完全浸没(获取要求组织宽度大于3mm。)

2. 收到组织后用组织处理缓冲液反复冲洗组织块10~15遍直至组织块表面无肉眼可见的污物。

3. 再次用组织处理缓冲液冲洗处理后的组织块，并用眼科剪剪成约5mm×5mm的小块，完全浸入装有人皮肤组织专用消化液I的15mL离心管中，将15 mL离心管用锡纸包裹紧密以避光，置于4℃冰箱中消化14~20h。

4. 次日，将15 mL 离心管取出，于超净台中打开，用组织处理缓冲液反复冲洗。撕下真皮层。(若无法私下，重新置于人皮肤组织专用消化液I中1-2小时，再次进行步骤4操作)

5. 将上皮层置于加入了人皮肤组织专用消化液II的培养皿中，用眼科剪轻柔地将上皮尽量剪碎，防止破坏培养皿底部导致污染。完全剪碎后，将培养皿盖好并用封口膜封住，置于细胞培养箱中消化15 min，每隔5 min取出至超净台中反复吹打混匀。

6. 15 min后，加入1mL胎牛血清终止消化，将细胞悬液转移至15 mL离心管中，250g离心5min，吸去上清。

7. 用人皮肤成纤维细胞专用培养基重悬，计数，按10^6/mL密度转移至培养皿中，在37℃、5%CO2条件下培养。

8. 待细胞密度长至80%-90%，进行消化传代培养建议1：2-1：3传代。(第一次消化时，进行少量难消化的细胞应舍去，避免细胞不纯)。

注：若想尽可能获得多的皮肤成纤维细胞，进行一下步骤。(以下步骤也可不进行操作)

步骤4中的真皮组织可贴壁培养，将真皮与表皮接触面贴于6孔板面，加极少量培养基，置于培养基培养，24小时内禁止挪动，3-4天后可能会有细胞爬出。

注意事项

1. 组织分离操作建议在冰上操作，组织处理缓冲液建议预冷处理。

2. 分离时应避免过度消化、过度重悬等操作导致细胞损伤。

3. 一个6cm培养皿可接种1×10^6个细胞。

4. 细胞专用消化液、培养基中含有微生物生长所需的营养成分，请在超净工作台内打开，按照所需要量分装，并且用封口膜封住瓶口，即取即用，以避免污染。