人外周血NK细胞分离试剂盒（阴选）

产品描述

NK细胞是机体最重要的免疫细胞类型一，在人外周血中的含量占约5-10%，人外周血NK细胞分离试剂盒可通过阴性分选法从人外周血中分离纯化出NK细胞，纯化后可用于进一步进行培养扩增或者直接进行RT-qPCR、Western blot、流式细胞术等各种免疫学实验。

适用范围

本试剂盒适用于分离人外周血中的NK细胞。

运输和存储条件

2-8 ℃保存与运输，保质期为参考下表，所有组分开封后，有效期为6个月。

试剂盒组成信息

表2. 试剂盒组成信息(10/20/50t)

分离步骤

1.使用人外周血单个核细胞分离液分离出高活力的PBMCs(10 ml外周血可取得1-2×107个单个核细胞)。

2.将细胞重悬于分选Buffer中，调整细胞密度为1×108 cells/mL(分选Buffer为含有2 mM EDTA和1% BSA 的PBS，使用前需预先通过0.22 μm滤膜过滤除菌)。

3.取100 uL细胞悬液加入2 μl NK细胞分选抗体混合均匀，4°C 孵育15 min，期间每隔5 min轻弹管壁使细胞与抗体混合均匀。

4.孵育完成后加入1 mL分选Buffer重悬，500 g，离心5 min，弃去上清，加入100 μL的分选Buffer重悬。

5. 吸取20 μl 链霉亲和素磁珠(吸取前涡旋振荡重悬磁珠，确保磁珠完全重悬，加入1mL分选Buffer进行重悬清洗磁珠，1000 g离心5 min或在磁场中吸附，弃去上清，加入20 μL的分选Buffer重悬)。

6.将磁珠与细胞混匀，混匀后4°C孵育10 min，期间每隔5 min轻弹管壁使细胞和磁珠混合均匀(此试剂盒说明书为分选1×107个PBMC中的NK细胞的使用说明，如果分选更多的细胞，则可按比例增加抗体、链霉亲和素磁珠的用量，少于1×107个细胞则将细胞悬液体积补至100 μl，加入2 μl 抗体和20 μl 链霉亲和素磁珠)。

7.孵育完成后，加入2.5 ml的分选Buffer重悬，用移液器上下混合吹打5次混匀(避免剧烈振荡或者上下颠倒混匀)，移入一个无菌流式管中。

8.将含有细胞的流式管置于磁力架上，静置5 min，待磁珠被吸附，细胞悬液变为清澈后将细胞悬液吸入一个无菌离心管中(期间流式管在磁力架中)，此细胞悬液中即包含纯化的人外周血NK细胞，500 g，离心5 min，弃去上清，收集细胞。

分选效果

对使用本试剂盒分选前后的人外周血中的NK细胞进行流式细胞分析检测显示，分选前后的NK细胞纯度分别为7.35%和95.87%。

注意事项

1.磁珠和抗体混合液使用和保存过程中均应避免冷冻、高速离心等操作。

2.操作过程应在无菌环境下进行，必须保证操作过程中使用的所有容器及所有直接接触细胞液的器具严格无菌。

3.本产品需要与磁力架配套使用。

4.本产品仅供科研使用。