大鼠股骨头微血管内皮细胞分离试剂盒

产品描述

股骨头微血管内皮细胞是股骨头微血管壁的主要结构，构成了骨内微血管的内衬，与骨内其他成分联系密切，参与许多骨的生理过程及病理过程，在骨吸收、新骨形成、血管再生、维持骨内微环境等方面具有重要作用。试剂盒采用消化法，使用本试剂盒提取所得的大鼠股骨头微血管内皮细胞纯度>90.0%，后续可直接进行RT-qPCR、Western blot等基本生物学实验。

适用范围

该试剂盒适用于不同型号大鼠股骨头微血管内皮细胞的分离，规格为3T，1T可供4-6只大鼠使用。

运输和存储条件

2-8 ℃保存与运输，保质期为参考下表。所有组分开封后，有效期为 6-8 周，建议尽快使用。

配套培养基信息

表1. 试剂盒组成信息

分离步骤

一、大鼠股骨头微血管内皮细胞分离及培养

实验前准备：分装所需大鼠股骨头微血管内皮细胞消化液I、II、大鼠组织处理缓冲液、大鼠股骨头微血管内皮细胞专用培养基;实验需自备手术器械、70 μm细胞筛、培养皿、巴氏管若干、离心管若干。

1.将大鼠麻醉后处死，用酒精喷洒大鼠全身进行消毒，放在培养皿里面，喷洒培养皿放入生物安全柜。

2.将大鼠固定，用无菌剪刀和钳子去除后腿上的皮肤和软组织，使股骨脱位并丢掉废弃组织。

3.使用无菌手术刀将股骨头分离，用止血钳将股骨头碾碎去除关节软骨，并放置在大鼠组织处理缓冲液中清洗3次。

4.取出组织，并将其放入装有5 mL大鼠股骨头微血管内皮细胞消化液I的15 mL离心管中，在37℃恒温振荡器中消化30 min。

5.消化完毕后，将经过消化的消化液I转移至新的15 mL离心管中，并加入等体积大鼠股骨头微血管内皮细胞消化终止液，吹打混匀终止消化，并使用70 μm细胞筛网过滤。

6.往装有股骨头的离心管中加入8 mL大鼠股骨头微血管内皮细胞消化液II，于37℃恒温振荡器消化5 min。

7.消化完成后，将经过消化的消化液I转移至新的离心管中，加入等体积大鼠股骨头微血管内皮细胞消化终止液混匀，并使用70 μm细胞筛网过滤。

8.将两次过滤的液体混合，混合完毕后离心：2000 rpm，6 min。

9.弃上清，用大鼠股骨头微血管内皮细胞专用培养基重悬后计数，即可进行铺板培养，铺板密度见表2。

表2. 大鼠股骨头微血管内皮细胞推荐铺板密度

注意事项

1. 组织分离操作建议在冰上操作，组织处理缓冲液建议预冷处理。

2. 分离时应避免过度消化、过度重悬等操作导致细胞损伤。

3. 细胞专用消化液、培养基中含有微生物生长所需的营养成分，请在超净工作台内打开，按照所需要量分装，并且用封口膜封住瓶口，即取即用，以避免污染。