大鼠前列腺成纤维细胞分离试剂盒

产品描述

大鼠前列腺成纤维细胞是前列腺间质的核心功能细胞，参与前列腺组织的结构支撑、细胞间信号调控，也是研究前列腺增生、肿瘤微环境的重要模型。本试剂盒主要通过酶消化法联合组织贴壁法进行大鼠前列腺成纤维细胞的原代提取。

适用范围

本试剂盒适用于分离大鼠前列腺成纤维细胞。

规格

本试剂盒规格为5次(提取1只6w-10w成年大鼠为1次计)

运输和存储条件

2-8 ℃保存与运输，保质期为参考下表，所有组分开封后，有效期为6-8周。

试剂盒组成信息

表1. 分离培养试剂盒组成信息

分离步骤

实验前准备：大鼠前列腺成纤维细胞分离试剂盒(大鼠前列腺组织清洗液、大鼠前列腺组织消化液、大鼠前列腺成纤维细胞专用培养基);实验需自备手术器械(提前高温灭菌)、6孔/6 cm/10 cm培养皿、离心管若干。

1. 包板：细胞种板前预先用1 mL大鼠前列腺成纤维细胞铺板工作液铺至培养器皿底部包被0.5-2 h(最长不超过6 h)，吸尽铺板工作液。使用1×PBS清洗2-3遍皿底后吸去PBS。

2. 颈椎脱臼处死大鼠，置于75%的酒精中浸泡5-10 min，剪开大鼠腹部皮肤和腹膜，暴露盆腔脏器，找到前列腺雄性大鼠前列腺分腹侧、背侧、外侧叶，任选一叶即可，优先取背侧叶，组织致密杂细胞少，用无菌弯镊轻轻剥离前列腺组织，去除附带的脂肪、血管、结缔组织;

3. 将剥离干净的前列腺组织放入盛有预冷大鼠前列腺组织清洗液的6 cm培养皿中，漂洗2-3次，洗去血渍，后将组织转移至1.5 mL离心管中。

4. 用无菌眼科剪将前列腺组织反复剪碎，转移至15mL离心管，加入体积为组织块3倍量的大鼠前列腺组织消化液Ⅰ(约2-3mL)，37℃、80-100 rpm低速振荡消化20 min。期间可每隔10 min用巴氏管吹打促进消化。

5. 再往15 mL离心管内加入1 mL大鼠前列腺组织消化液Ⅱ，继续37℃，80-100 rpm低速振荡消化5 min。

6. 将离心管从摇床中取出，置于离心架上静置5 min，收集上清液，室温放置。

7. 用2 mL大鼠前列腺组织洗液洗组织沉淀，置于离心架上静置5 min，收集上清液，室温保存，重复收集7次

8. 将收集所得上清液汇集至一个离心管内，300 g，离心10 min。

9. 用1 mL大鼠前列腺成纤维专用培养基重悬沉淀，将细胞悬液按照3×105/mL细胞密度铺至铺板工作液包被的培养器皿中，转移至细胞培养箱。待细胞密度长至80%-90%，进行消化传代培养建议1：2-1：3传代。(第一次消化时，建议消化时间不超过3 min，少量难消化的细胞应舍去，避免细胞纯度较低)。

注意事项

1. 建议全程分离操作过程在冰上进行，可提高细胞活性。

2. 若想尽可能获得多的大鼠前列腺成纤维细胞，进行以下步骤：

步骤6中的未消化完的前列腺层组织可贴壁培养，具体操作如下：先加入少量专用培养基完全湿润6孔板或培养皿底部，完毕后弃去培养基，将未消化完的前列腺层组织直接贴于底部，放于细胞培养箱内倒扣培养容器1-2 h(可以适当延长时间，保证组织块完全贴牢培养器皿底部的同时避免前列腺组织干燥);前列腺组织贴牢后，将培养器皿转移至安全柜中，往内轻轻沿着侧壁加入专用培养基覆盖大鼠前列腺组织，置于培养基培养，24 h内禁止挪动，等待3-4天后会有成纤维细胞爬出。

3. 试剂盒内各组分中含有微生物生长所需的营养成分，请在超净工作台内打开，按照所需要量分装，并且用封口膜封住瓶口，即取即用，以避免污染。