大鼠脑膜细胞分离试剂盒

产品描述

小鼠脑膜细胞分离自脑膜组织;脑膜是紧贴脑表面和脑室内面的一层透明薄膜，内含丰富的血管。在脑室与室管膜上皮共同形成脉络丛产生脑脊液。脑膜的病变导致脑脊液动力学改变，从而形成脑脊液压力增高，最终导致脑积水。脑膜细胞是组成脑膜纤维化的主要细胞。大鼠脑膜包含硬脑膜、蛛网膜、软脑膜三层，原代提取以混合脑膜细胞为目标(核心为成纤维细胞，还含少量内皮细胞、胶质细胞、巨噬细胞等)。本试剂盒主要通过酶消化法联合组织贴壁法进行大鼠脑膜细胞的原代提取。

适用范围

本试剂盒适用于分离幼鼠/成年鼠的大鼠提取大鼠脑膜细胞。

规格

本试剂盒规格为5次(提取1只大鼠为1次计)。

运输和存储条件

2-8 ℃保存与运输，保质期为参考下表，所有组分开封后，有效期为6-8周。

试剂盒组成信息

分离步骤

实验前准备：大鼠脑膜细胞分离试剂盒;实验需自备手术器械(提前高温灭菌)、6孔/6 cm/10 cm培养皿、离心管若干。

1. 颈椎脱臼处死大鼠，置于75%的酒精中浸泡5-10 min，剪开头部皮肤，用骨剪小心剪开颅骨(避免损伤脑膜和脑组织)，剥离颅骨时滴加少量预冷大鼠脑膜组织清洗液湿润，减少脑膜撕裂。

2. 脑膜剥离后，用大鼠脑膜组织清洗液在6 cm培养皿中反复冲洗，去除多余血管和颅骨碎片(血渍需彻底洗净，否则引入大量血细胞)，后将组织转移至1.5 mL离心管中。

3. 用无菌眼科剪将脑膜组织剪碎为小组织块(不要剪太碎，否则细胞活性会较差)，加入1 mL大鼠脑膜组织消化液，37℃培养箱内消化45-60 min，期间每隔10 min从培养箱中取出，用移液枪吹打几次。

4. 随后在250 g，离心10 min，去除上清，用1 mL大鼠脑膜专用培养基重悬沉淀，接种至T25培养瓶中，垂直放入培养箱，37℃，5%CO2，培养6 h后将培养瓶缓慢方平，静止培养。待细胞密度长至80%-90%，进行消化传代培养建议1：2-1：3传代。(第一次消化时，建议消化时间不超过3 min，少量难消化的细胞应舍去，避免细胞纯度较低)。

注意事项

1. 建议全程分离操作过程在冰上进行，可提高细胞活性。

2. 若想尽可能获得多的大鼠脑膜细胞，进行以下步骤：

步骤3中的未消化完的脑膜层组织可贴壁培养，具体操作如下：先加入少量专用培养基完全湿润6孔板或培养皿底部，完毕后弃去培养基，将未消化完的脑膜层组织直接贴于底部，放于细胞培养箱内倒扣培养容器1-2 h(可以适当延长时间，保证组织块完全贴牢培养器皿底部的同时避免脑膜组织干燥);脑膜组织贴牢后，将培养器皿转移至安全柜中，往内轻轻沿着侧壁加入专用培养基覆盖大鼠脑膜组织，置于培养基培养，24 h内禁止挪动，等待3-4天后会有脑膜细胞爬出。

3. 试剂盒内各组分中含有微生物生长所需的营养成分，请在超净工作台内打开，按照所需要量分装，并且用封口膜封住瓶口，即取即用，以避免污染。