小鼠骨骼肌细胞分离试剂盒

产品描述

小鼠骨骼肌细胞通常分离自小鼠的四肢肌肉组织。骨骼肌是动物体内最大的组织之一，约占体重的40%，主要负责身体的运动和姿势维持。骨骼肌细胞，又称横纹肌细胞，呈长柱形，具有多个细胞核，且细胞核多位于细胞膜下方。细胞表面有明显的横纹，这是由肌原纤维的排列形成的;骨骼肌细胞由肌膜、肌浆(细胞质)、肌原纤维和细胞核等部分组成。肌原纤维是骨骼肌细胞的主要结构成分，由粗肌丝和细肌丝组成，通过滑动机制实现肌Chemicalbook肉的收缩。本试剂盒采用酶消化法联合差速贴壁法进行小鼠骨骼肌细胞的提取纯化。

适用范围

该试剂盒适用于6天左右的C57BL/6J、BALB/c等不同品系的小鼠提取小鼠骨骼肌细胞。

规格

本试剂盒规格为5次(以5只小鼠为1次计)

运输和存储条件

2-8℃保存与运输，保质期为参考下表。试剂开封后，有效期为6-8周。

配套培养基信息

表1. 分离培养试剂盒组成信息

分离步骤

实验前准备：小鼠骨骼肌细胞组织专用消化酶、小鼠骨骼肌细胞组织处理缓冲液(冰)、小鼠骨骼肌细胞专用培养基;实验需自备手术器械、6孔/10 cm培养皿、70
μm滤网、离心管若干。以下以5只C57BL/6J为例：

1. 选用5只6 d左右的新生鼠，处死后放置75%酒精中浸泡3-5
min，随后小心剪取后肢肌肉剔除脂肪、筋膜，以免引入杂细胞，用适量小鼠骨骼肌细胞组织处理缓冲液漂洗2-3遍，随后将组织块置于1.5 mL Ep管或6
cm皿中。(建议在冰上操作，减少组织缺氧和细胞损伤)

2. 将肌肉块剪成浆状后(尽可能的剪碎，否则可能会消化不充分)，加入3倍体小鼠骨骼肌细胞组织专用消化酶，于37℃、5%CO2培养箱中消化15
min(期间可取出3次用巴氏管进行轻柔吹打10下左右)。

3. 用5倍体积小鼠骨骼肌细胞专用培养基中止消化，再用70 μm滤网过滤细胞悬液至新的50 mL离心管中，1400 rpm离心10
min，弃上清。

4. 离心后的细胞沉淀用2-3
mL小鼠骨骼肌细胞专用培养基重悬后，铺至6孔板内(标记为孔1)，于37℃、5%CO2培养箱中培养30分钟记为第一次贴壁。

5. 30分钟后吸取上清转移至6孔板的另外一孔(孔2)，过夜培养(孔1的细胞为非目的细胞，无须保留)。

6. 24小时后吸取孔2的上清液进行离心：1000 rpm，5
min，同时孔2需要添加新的小鼠骨骼肌细胞专用培养基进行培养(孔2的细胞为目的细胞)。

7. 孔2上清液离心完毕后去除上清，加入新的小鼠骨骼肌细胞专用培养基重悬后铺至6孔板内新的孔(孔3，亦为目的细胞)。

8. 24小时后对孔2和孔3贴壁的细胞进行换液，之后可每48小时换液一次。

注意事项

1. 建议全程分离操作过程在冰上进行，可提高细胞活性。

2.小鼠骨骼肌细胞专用消化酶、培养基中含有微生物生长所需的营养成分，请在超净工作台内打开，按照所需要量分装，并且用封口膜封住瓶口，即取即用，以避免污染。