小鼠骨髓B细胞分离试剂盒（阴选）

产品描述

小鼠骨髓B细胞是B淋巴细胞的起源与发育成熟的核心场所，骨髓中的造血干细胞分化为祖B细胞，经前B细胞、未成熟B细胞等阶段，最终发育为成熟B细胞(部分迁移至外周淋巴器官)，是体液免疫应答的关键细胞，广泛用于免疫发育、抗体分泌及自身免疫病机制研究。小鼠骨髓B细胞分离试剂盒可通过阴性分选法从小鼠骨髓中分离纯化出B细胞，纯化后可用于进一步进行培养或者直接进行RT-qPCR、Western blot、流式细胞术等各种免疫学实验。

适用范围

本试剂盒适用于分离小鼠骨髓中的B细胞，以1×10⁷单细胞悬液为1次计。

运输和存储条件

2-8 ℃保存与运输，保质期为参考下表，所有组分开封后，有效期为6个月。

试剂盒组成信息

表2. 试剂盒组成信息(10/20/50t)

分离步骤

1.取新鲜小鼠股骨和胫骨，使用冲骨髓法获得骨髓腔内的细胞悬液，以预冷的PBS冲洗40 μm细胞筛网，并用70 μm细胞筛网进行过滤骨髓细胞，收集细胞悬液于15 mL离心管中，500 g，离心5 min。

2.离心结束，弃上清，加入5 mL红细胞裂解液，室温裂解5 min，再加入20 mL PBS，500 g，离心5 min。

3.离心完成后，弃上清，将骨髓细胞重悬于PBS，细胞悬液用40 μm细胞筛网过滤后，计数。计数完成后，将骨髓细胞悬液500 g，离心5 min。

4.将细胞重悬于分选buffer中，调整细胞密度为1×108cells/mL(分选buffer为含有2 mM EDTA 和2%胎牛血清(FBS)的PBS或者含有2 mM EDTA和0.5%BSA的PBS，使用前需预先通过0.22 μm滤膜过滤除菌)。

5.取100 μL细胞悬液(1×107个骨髓单细胞)加入20 μL小鼠骨髓B细胞阴性分选抗体混合均匀，室温孵育10-15 min，期间每隔3 min 轻弹管壁使细胞与抗体混合均匀。

6.吸取20 μL B细胞分选磁珠(吸取前涡旋振荡重悬磁珠，确保磁珠完全重悬，加入1 mL B细胞分选Buffer进行重悬清洗磁珠，磁力架吸附5 min，弃去上清，加入20 μL的B细胞分选Buffer重悬)。

7.孵育完成的细胞中加入1 mL分选buffer清洗，300g， 3 min离心去上清，100 μL分选buffer重悬。

8.细胞悬液中直接加入20 μL B细胞分选磁珠，混匀后室温孵育10-15 min(此试剂盒说明书为分选1×107个骨髓细胞中的B细胞的使用说明，如果分选更多的细胞，则可按比例增加小鼠骨髓B细胞阴性分选抗体、B细胞分选磁珠的用量，少于1×107个细胞则将细胞悬液体积补至100 μL，加入20 μL小鼠骨髓B细胞阴性分选抗体和20 μL B细胞分选磁珠)。

9.孵育完成后，加入1 mL的B细胞分选Buffer重悬。

10.将含有细胞的EP管置于磁力架上，静置5 min，待磁珠被吸附，细胞悬液变为清澈后将细胞悬液吸入一个无菌离心管中，此细胞悬液中即包含纯化的小鼠骨髓B细胞，300 g，离心3 min，弃去上清，收集细胞。

分选效果

对使用本试剂盒分选前后的小鼠骨髓中的B细胞进行流式细胞分析检测显示，分选后的B细胞纯度为92.00%。

注意事项

1.磁珠和抗体混合液使用和保存过程中均应避免冷冻、高速离心等操作。

2.操作过程应在无菌环境下进行，必须保证操作过程中使用的所有容器及所有直接接触细胞液的器具严格无菌。

3.本产品需要与磁吸分离器(IMC-M02)配套使用。

4.本产品仅供科研使用。