小鼠脾脏CD11b+单核细胞分离试剂盒（阴选）

产品描述

小鼠脾脏单核细胞是定居于脾脏组织中的髓系免疫细胞，属于单核-巨噬细胞系统的重要成员，兼具免疫防御、免疫调节及分化潜能，是连接固有免疫与适应性免疫的关键枢纽细胞，在生理稳态维持和病理过程调控中发挥核心作用。小鼠脾脏CD11b+单核细胞分离试剂盒可通过阴性分选法从小鼠脾脏中分离纯化出单核细胞，纯化后可用于进一步进行培养扩增或者直接进行RT-qPCR、Western blot、流式细胞术等各种免疫学实验。

适用范围

本试剂盒适用于分离小鼠脾脏中的单核细胞，以1×10⁷单细胞悬液为1次计。

运输和存储条件

2-8 ℃保存与运输，保质期为参考下表，所有组分开封后，有效期为6个月。

试剂盒组成信息

表2. 试剂盒组成信息(10/20/50t)

分离步骤

1.取新鲜小鼠脾脏一只，在70 μm细胞筛网上研磨脾脏，以预冷的PBS冲洗细胞筛网，收集细胞悬液于50 mL离心管中，500 g，离心5 min(一个小鼠脾脏可取得0.8-1.5×108个脾脏细胞)。

2.离心结束，弃上清，加入5 mL红细胞裂解液，室温裂解5 min，再加入20 mL PBS，500 g，离心5 min。

3.离心完成后，弃上清，将脾脏细胞重悬于PBS，细胞悬液用70 μm细胞筛网过滤后，计数。计数完成后，将脾脏细胞悬液500 g，离心5 min。

4.将细胞重悬于分选buffer中，调整细胞密度为1×108cells/mL(分选buffer为含有2 mM EDTA 和2%胎牛血清(FBS)的PBS或者含有2 mM EDTA和0.5%BSA的PBS，使用前需预先通过0.22 μm滤膜过滤除菌)。

5.取100 μL细胞悬液(1000w个脾脏细胞)加入20 μL小鼠脾脏CD11b+单核细胞阴性分选抗体混合均匀，室温孵育10-15min，期间每隔3 min 轻弹管壁使细胞与抗体混合均匀。

6.吸取20 μL CD11b+单核细胞分选磁珠(吸取前涡旋振荡重悬磁珠，确保磁珠完全重悬，加入1 mL CD11b+单核细胞分选Buffer进行重悬清洗磁珠，磁力架吸附5 min，弃去上清，加入20 μL的CD11b+单核细胞分选Buffer重悬)。

7.孵育完成的细胞中加入1 mL分选buffer清洗，300 g，3 min离心去上清，100 μL分选buffer重悬。

8.细胞悬液中直接加入20 μL CD11b+单核细胞分选磁珠，混匀后室温孵育10-15min(此试剂盒说明书为分选1×107个脾脏细胞中的CD11b+单核细胞的使用说明，如果分选更多的细胞，则可按比例增加小鼠脾脏CD11b+单核细胞阴性分选抗体、CD11b+单核细胞分选磁珠的用量，少于1×107个细胞则将细胞悬液体积补至100 μL，加入20 μL小鼠脾脏CD11b+单核细胞阴性分选抗体和20 μL CD11b+单核细胞分选磁珠)。

9.孵育完成后，加入1 mL的CD11b+单核细胞分选Buffer重悬。

10.将含有细胞的EP管置于磁力架上，静置5 min，待磁珠被吸附，细胞悬液变为清澈后将细胞悬液吸入一个无菌离心管中，此细胞悬液中即包含纯化的小鼠脾脏CD11b+单核细胞，300 g，离心3 min，弃去上清，收集细胞。

分选效果

对使用本试剂盒分选前后的小鼠脾脏中的CD11b+单核细胞进行流式细胞分析检测显示，分选后的CD11b+单核细胞纯度为88.61%。

注意事项

1.磁珠和抗体混合液使用和保存过程中均应避免冷冻、高速离心等操作。

2.操作过程应在无菌环境下进行，必须保证操作过程中使用的所有容器及所有直接接触细胞液的器具严格无菌。

3.本产品需要与磁吸分离器(IMC-M02)配套使用。

4.本产品仅供科研使用。