小鼠成骨细胞分离试剂盒

产品描述

鼠成骨细胞分离自颅骨组织;成骨细胞是骨形成的主要功能细胞，负责骨基质的合成、分泌和矿化。骨不断地进行着重建，骨重建过程包括破骨细胞贴附在旧骨区域，分泌酸性物质溶解矿物质，分泌蛋白酶消化骨基质，形成骨吸收陷窝;其后，成骨细胞移行至被吸收部位，分泌骨基质，骨基质矿化而形成新骨;破骨与成骨过程的平衡是维持正常骨量的关键。成骨细胞培养不仅有助于了解骨形成机制、骨骼系统疾病的分子和细胞学基础，也是药物筛选、生物材料开发和生物工程研究的重要手段。试剂盒采用消化法，使用本试剂盒提取所得的小鼠软骨细胞纯度>90.0%，后续可直接进行RT-qPCR、Western blot等基本生物学实验。

适用范围

该试剂盒适用于不同类型的新生小鼠(2-3天内)成骨细胞的分离，规格为5T，1T可供3只新生小鼠使用。

运输和存储条件

2-8 ℃保存与运输，保质期为参考下表。所有组分开封后，有效期为 6-8 周，建议尽快使用。

配套培养基信息

表1. 试剂盒组成信息

分离步骤

实验前准备：小鼠骨组织处理缓冲液、小鼠成骨细胞消化液I、II、小鼠成骨细胞洗液、小鼠成骨细胞专用培养基;实验需自备手术器械、10 cm培养皿、T25培养瓶、巴氏管若干、离心管若干。

1.取3只2-3天新生鼠，并用70%乙醇充分消毒。将新生鼠放入10 cm培养皿中。

2.用大剪刀取下头部，抓住颈背处的头部，沿着颅底做一个小切口。使用镊子和镊子小心地从头骨上去除皮肤和脑组织。切掉下颌，刮掉颅骨边缘周围的任何多余的组织和软骨。将颅骨切成两半，放入15 mL离心管中;用适量小鼠骨组织处理缓冲液充分洗涤2-3遍。

3.将头盖骨用3 mL小鼠成骨细胞消化液I中在37°C消化10 min。(去除颅骨组织表面的成纤维细胞)并用移液枪弃除小鼠成骨细胞消化液I。用3 mL小鼠成骨细胞洗液清洗颅骨组织，再用移液枪去除上清液。

4.往15 mL离心管中加入3 mL小鼠成骨细胞消化液II中在37℃消化60-90 min。

6.将消化液上清转移到新的15 mL离心管中。取5 mL小鼠成骨细胞洗液洗涤颅骨，将洗涤液转移到含有消化液的15 mL管中。

7.在室温下以1500×g离心，5分钟，弃去上清液。用5 mL小鼠成骨细胞专用培养基重悬细胞沉淀。

8.将5 mL的细胞悬液加入到T25培养瓶中，37℃、5% CO2 培养箱培养。

注意事项

1. 组织分离操作建议在冰上操作，组织处理缓冲液建议预冷处理。

2. 分离时应避免过度消化、过度重悬等操作导致细胞损伤。

3. 细胞专用消化液、培养基中含有微生物生长所需的营养成分，请在超净工作台内打开，按照所需要量分装，并且用封口膜封住瓶口，即取即用，以避免污染。

4. 若想尽可能获得多的小鼠成骨细胞，进行以下步骤：

步骤6中的未消化完的颅骨组织可贴壁培养，具体操作如下：先加入少量专用培养基完全湿润6孔板或培养皿底部，完毕后弃去培养基，将未消化完的颅骨组织直接贴于底部，放于细胞培养箱内静置1-2 h(可以适当延长时间，保证组织块完全贴牢培养器皿底部的同时避免颅骨组织干燥);颅骨组织贴牢后，将培养器皿转移至安全柜中，往内轻轻沿着侧壁加入专用培养基覆盖小鼠颅骨组织，置于培养基培养，24 h内禁止挪动，等待3-4天后会有成骨细胞爬出。