小鼠骨髓巨噬细胞分离试剂盒

产品描述

巨噬细胞源自单核细胞，属于免疫细胞，有多种功能，属不繁殖细胞群，难以长期培养。巨噬细胞在吞噬和清除异物和衰老死亡细胞、分泌生物活性物质，调节血细胞生成与参与免疫应答等方面发挥着广泛的生物学作用，是一类在体内发挥重要免疫效应的细胞，为体内的稳态维持和组织防御提供保障。

适用范围

该试剂盒适用于Balb/c、C57BL/6等不同品系的6-8周小鼠原代骨髓巨噬细胞提取试剂盒。

规格

本试剂盒规格为5T，1T可供2只小鼠使用。

运输和存储条件

2-8 ℃保存与运输，保质期为参考下表。所有组分开封后，有效期为6-8周，建议尽快使用。

配套培养基信息

表1. 分离培养试剂盒组成信息

分离步骤

实验前准备：分装好的小鼠骨组织处理缓冲液、专用解离液、专用红细胞裂解液和专用培养基;实验需自备无菌手术器械、1mL规格的一次性使用无菌注射器、70 μM细胞筛网、培养器皿、离心管若干。

一、骨髓巨噬细胞提取：下面以C57小鼠为例

1 将小鼠安乐死后，在75%酒精里浸泡20分钟，取出股骨和胫骨，用干净纱布将肌肉剥离干净(骨头需保持完整)，放入组织处理缓冲液中浸泡。

2 转移至细胞房超净台内，再将股骨与胫骨拿进细胞台，用预冷的组织处理缓冲液洗涤股骨和胫骨2-3次。

3 取出新的6cm培养皿，剪掉骨头两端，用1mL注射器吸满小鼠骨髓巨噬细胞专用解离液，将骨头内容物冲出(一根骨头重复冲出至内容物完全冲出，骨头肉眼可见透明)。

4 所有骨头冲完后，将培养皿内的红色固形物轻柔反复吹散，而后将细胞悬液经70 μm筛网过滤，收集于15 mL 离心管。

5 离心：1500 rpm，5min，4℃。

6 离心后弃上清，加入2 mL小鼠骨髓专用红细胞裂解液重悬，吹打混匀，静置5min。

7 离心：1500 rpm，5min，4℃。

8 弃上清，加入小鼠骨髓巨噬细胞专用培养基，轻柔吹打重悬混匀，离心：1500 rpm，5min，4℃。

9 用小鼠骨髓巨噬细胞专用培养基重悬细胞沉淀，进行铺板。

10 第三天补适量小鼠骨髓巨噬细胞专用培养基(以6孔板为例，添加1mL小鼠骨髓巨噬细胞专用培养基)。

11 培养至第七天后即可进行实验。

注意事项

1. 与股骨和胫骨相黏连的肌肉组织应尽量去除，避免影响分离出来的细胞纯度。

2. 冲洗骨髓腔过程中应保持全程在冰上操作，可一定程度维持细胞的活性。

3. 小鼠骨髓巨噬细胞贴壁后消化困难，建议细胞分离完毕后直接铺至实验对应培养容器内。

4. 小鼠骨髓巨噬细胞组织专用解离液和小鼠骨髓巨噬细胞专用完全培养基中含有微生物生长所需的营养成分，请在超净工作台内打开，按照所需要量分装，并且用封口膜封住瓶口，即取即用，以避免污染。