小鼠神经星形胶质细胞分离试剂盒

产品描述

小鼠神经星形胶质细胞分离自脑组织;大脑分左右两个半球，大脑皮质(灰质)覆盖着每个大脑半球的大部分，它是神经元胞体集中的地方。内部则是由神经纤维或髓鞘构成的白质。每一个半球都有三个面，即外侧面(约占整个皮质面积的1/3)、内侧面和底面(占2/3的面积);半球表面有很多深浅不等的沟或裂，沟或裂之间的隆起叫回，它们大大增加了大脑的表面积;大脑外侧面重要的沟、裂有大脑外侧裂、顶枕裂和中央沟。由于三沟裂之界隔，使大脑皮质组分为额叶、顶叶、颞叶、枕叶四大部分。神经星形胶质细胞，是哺乳动物脑内分布最广泛的一类细胞，也是胶质细胞中体积最大的一种。用经典的金属浸镀技术(银染色)显示此类胶质细胞呈星形，从胞体发出许多长而分支的突起，伸展充填在神经细胞的胞体及其突起之间，起支持和分隔神经细胞的作用。细胞突起的末端常膨大形成脚板或称终足，有些脚板贴附在邻近的毛细血管壁上，因此这些脚板又被称为血管足或血管周足，靠近脑脊髓表面的脚板则附着在软膜内表面，彼此连接构成胶质界膜。细胞刚分离时呈圆形，24 h后大部分细胞贴壁，均匀分布于瓶底，部分细胞伸出细小突起，培养4-5 d后细胞数量明显增多，呈扁平、多角形，胞质丰富且核浆较少，细胞核呈椭圆形，偏于胞体一侧。神经星形胶质细胞是中枢神经系统的重要细胞组成，不仅具有支持功能，还能够合成及分泌多种神经活性物质，在维持神经元内外环境、生存、迁移、免疫调节、信号转导、轴突生长及功能整合等方面具有重要作用。

适用范围

该试剂盒适用于不同型号3天内新生鼠神经星形胶质细胞的分离，规格为5T，1T可供3只新生鼠使用。

运输和存储条件

2-8 ℃保存与运输，保质期为参考下表。所有组分开封后，有效期为 6-8 周，建议尽快使用。

配套培养基信息

表1. 试剂盒组成信息

分离步骤

实验前准备：

1. 小鼠大脑皮层组织处理缓冲液、小鼠大脑皮层组织专用消化酶、小鼠大脑皮层组织专用消化酶消化终止液分装适量;实验需自备冰盒、手术器械、6cm/10cm培养皿、离心管若干。

2. 包被培养器皿：取一个新T75培养瓶，加入8-10 mL小鼠星形胶质细胞专用包被液，于37℃培养箱包被30 min以上。

一、小鼠神经星形胶质细胞分离及培养

注：全程冰上操作

1. 取3只新生鼠安乐死，放入培养皿内，获取新生鼠头部组织。用组织处理缓冲液洗涤1-2次新生鼠头部，直到没有血迹为止。

2. 用弹簧剪及尖头镊配合剥离胎鼠头部皮肤及脑壳，完整取出脑组织，放入盛有组织处理缓冲液的新培养皿中，洗涤1次。

3. 将脑组织移至一个新的盛有组织处理缓冲液的中皿(两三个脑子用一个中皿，防止太久大鼠皮层神经元细胞组织处理缓冲液升温)，在解剖镜下去除脑膜、嗅球(绿色的那部分)、小脑及两个大脑半球中间的连接物。

4. 将去除完毕的两侧大脑皮层转移至含有1 mL小鼠大脑皮层组织专用消化酶的离心管中，用巴氏管或移液管轻柔吹吸大脑皮层组织至无肉眼可见的大块组织(尽量避免产生气泡)。

5. 向离心管内再加入1 mL小鼠大脑皮层组织专用消化酶，置于37℃培养箱中消化约12-15min(期间每5min轻柔摇匀一次)。消化结束后，朝离心管加入4 mL高小鼠大脑皮层组织专用消化酶消化终止液进行终止消化。

6. 使用1 mL移液枪或巴氏管轻柔吹打组织悬液，使细胞充分分散，操作过程需避免剧烈冲击，同时避免气泡产生。

7. 将细胞悬液加至70 μm细胞筛上方进行过滤，过滤完毕后收集滤液至15 mL离心管中，离心：4℃，1000 rpm，10 min，。

8. 离心结束后，弃上清液，向沉淀中加入适量小鼠神经星形胶质细胞专用培养基，轻柔缓慢吹打，使细胞均匀重悬。

9. 取出包被好的T75培养瓶，回收小鼠星形胶质细胞专用包被液(该包被液可重复使用3次左右)。

10. 往T75培养瓶内加入小鼠神经星形胶质细胞专用培养基及细胞悬液，保持培养体系为15 mL，放入37℃培养箱进行培养

11. 于24h后进行初次全换液，期间静置培养，期间3-5天进行全换液一次，注意观察细胞密度。待T75瓶长满后，置于37度恒温摇床(200 r/min)震荡摇晃培养2～4小时，收集摇晃后的培养液，贴壁细胞即为纯度较高的小鼠神经星形胶质细胞

注意事项

1. 组织分离操作建议在冰上操作，组织处理缓冲液建议预冷处理。

2. 分离时应避免过度消化、过度重悬等操作导致细胞损伤。

3. 细胞专用消化液、培养基中含有微生物生长所需的营养成分，请在超净工作台内打开，按照所需要量分装，并且用封口膜封住瓶口，即取即用，以避免污染。