小鼠滑膜成纤维细胞分离试剂盒

产品描述

小鼠滑膜成纤维细胞(mouse synovial fibroblasts, MSFs)是关节滑膜组织中的主要细胞成分之一，位于滑膜内膜下层，兼具成纤维细胞的结构特征和免疫调节的功能属性，在关节生理稳态维持和类风湿关节炎(RA)等炎症性关节病的病理进程中发挥核心作用。本试剂盒主要通过酶消化法联合组织贴壁法进行小鼠滑膜成纤维细胞的原代提取。

适用范围

本试剂盒适用于分离小鼠膝关节滑膜组织成纤维细胞。

规格

本试剂盒规格为5次(提取10-15只6w-12w成年小鼠为1次计)

运输和存储条件

2-8 ℃保存与运输，保质期为参考下表，所有组分开封后，有效期为6-8周。

试剂盒组成信息

表1. 分离培养试剂盒组成信息

分离步骤

实验前准备：小鼠滑膜成纤维细胞分离试剂盒(小鼠组织清洗液、小鼠滑膜组织消化液、小鼠滑膜成纤维细胞专用培养基);实验需自备手术器械(提前高温灭菌)、6孔/6 cm/10 cm培养皿、离心管若干。

1. 颈椎脱臼处死小鼠，置于75%的酒精中浸泡3-5 min;

2. 膝关节正中切开皮肤，分离肌肉，露出膝盖骨，继续向下分离，见平滑光亮的滑膜组织，用眼科剪分离关节囊的滑膜层和纤维层，取出滑膜层组织，避免夹带软骨、韧带或骨碎片;

3. 在6 cm培养皿中用5 mL预冷的小鼠组织清洗液洗涤滑膜层组织2-3遍，将滑膜层组织洗净，去除残留血液和组织碎屑，再用洁净的眼科剪将组织块尽可能的剪小块(1 mm³大小);

4. 将含有滑膜层组织的组织清洗液转移至15 mL离心管内，离心300 g，5 min 洗涤2次，弃上清;

5. 往15 mL的离心管内加入1 mL小鼠滑膜组织消化液，37℃振荡水浴消化1-2 h，期间多次颠倒离心管使其充分消化;

6. 观察组织成絮状后，用巴氏吸管轻轻吹打200下，过100 μm的筛网，用1.5 mL EP管收集滤液;

7. 1000 g离心5 min，弃上清;

8. 用1 mL小鼠滑膜成纤维细胞专用培养基重悬沉淀，待细胞密度长至80%-90%，进行消化传代培养建议1：2-1：3传代。(第一次消化时，建议消化时间不超过3 min，少量难消化的细胞应舍去，避免细胞纯度较低)。

注意事项

1. 建议全程分离操作过程在冰上进行，可提高细胞活性。

2. 若想尽可能获得多的小鼠滑膜成纤维细胞，进行以下步骤：

步骤6中的未消化完的滑膜层组织可贴壁培养，具体操作如下：先加入少量专用培养基完全湿润6孔板或培养皿底部，完毕后弃去培养基，将未消化完的滑膜层组织直接贴于底部，放于细胞培养箱内倒扣培养容器1-2 h(可以适当延长时间，保证组织块完全贴牢培养器皿底部的同时避免滑膜组织干燥);滑膜组织贴牢后，将培养器皿转移至安全柜中，往内轻轻沿着侧壁加入专用培养基覆盖小鼠滑膜组织，置于培养基培养，24 h内禁止挪动，等待3-4天后会有成纤维细胞爬出。

3. 试剂盒内各组分中含有微生物生长所需的营养成分，请在超净工作台内打开，按照所需要量分装，并且用封口膜封住瓶口，即取即用，以避免污染。