小鼠肝kupffer细胞（免疫荧光鉴定报告）

货号：IMP-M067 组织：肝脏

规格：5x10⁵cells/T25或1mL冻存管

形态：圆形或多角形，贴壁生长培养基：小鼠肝kupffer细胞专用培养基

培养环境：气相：95%空气+5%二氧化碳;温度：37℃

传代特性：不可传代

产品货期：2-3周左右

小鼠肝kupffer细胞说明书

价格：¥4350

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背景介绍培养操作冻存步骤售后服务

产品简介

肝kuffer细胞位于肝血窦腔内，具有变形运动和活跃的吞噬功能，还具有处理和传递抗原、调节机体免疫应答等作用，属单核吞噬细胞系统主要成员。是清除细菌及其毒素从而拮抗感染的重要防御细胞，同时也通过释放各种炎症介质，在内毒素性肝损伤的发生中发挥主导作用。

一、细胞基本属性
细胞名称	原代小鼠肝kupffer细胞（免疫荧光鉴定报告）
种属来源	小鼠
组织来源	肝脏
生长特性	贴壁生长
形态特征	圆形或多角形
质量检测	巨噬细胞标志物（F4/80）免疫荧光染色为阳性，纯度高于 90%，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等
产品规格	5x10⁵cells/T25或1mL冻存管
培养基	小鼠肝kupffer细胞完全培养基
培养条件	气相：95%空气+5%二氧化碳；温度：37℃
换液频率	每2-3天换液一次
消化液	0.25%胰蛋白酶
特别说明	以下细胞培养冻存处理仅供参考，具体操作步骤以随货产品说明书为主
二、细胞培养操作
复苏	1.将恒温水浴锅中的水预热到 37℃。 2.准备一支15ml离心管，加入5ml小鼠肝脏Kupffer细胞专用培养基，放入 37℃水浴锅中预热。 3.戴上护目镜，厚毛线手套后，从液氮罐中取出要复苏的细胞，尽快转入 37℃恒温水浴锅中复温晃动冻存管以提高复温速率。 4.将融化了的冻存管中的细胞吸入事先准备的离心管中，混匀后，500xg 离心 5min。 5.准备一个 T-25 培养瓶，写上细胞名称、日期，再加入 4ml 小鼠肝脏Kupffer细胞专用培养基。 6.离心完成后弃去上清，用 1ml 小鼠肝脏Kupffer细胞专用培养基重悬细胞后，转入 T-25 细胞培养中，混匀后转入 CO2培养箱中培养静置。
培养	小鼠肝脏Kupffer细胞贴壁后即可进行后续实验。为保证细胞体外培养的营养供给和代谢废物清除，建议48h换一次液。
消化	1.吸出原培养液。 2.加入 2-3ml 不含钙、镁离子的 PBS(37℃预热)润洗细胞一次，吸出 PBS 丢弃。 3.加入 1ml 专用消化液(IMC-500)至培养瓶中，并轻轻晃动培养瓶至消化液浸润所有细胞，放入 37℃培养箱消化细胞 10-20min。(期间需取出培养瓶进行观察) 4.倒置显微镜下观察，待细胞明显变圆有间隙后(全程请不要拍打培养瓶)，再加入 3-5ml小鼠肝脏Kupffer细胞专用培养基终止消化(稀释法终止消化，则培养基用量不应低于 5ml)。 5.用吸管轻轻吹打混匀、分散细胞，3000-500xg，5min离心去除残留胰酶。 6.去掉上清，结合需求进行后续相关实验操作。
注意	小鼠肝脏Kupffer细胞是一种贴壁细胞，细胞形态呈现为圆形或多角形，体积较小;24h后部分呈星形或棘状，细胞向周围伸展，体积逐渐增大等，此为正常现象。细胞不具备增殖特性，不建议传代，建议您收到细胞后尽快开展相关实验。
培养注意事项	1.收到常温细胞后，首先观察细胞瓶是否完好，有无漏液现象，若有上述问题发生请及时和我们联系。 2.显微镜下观察细胞状态。因运输问题，部分细胞由于温度变化及剧烈碰撞死亡破碎形成碎片，属正常现象。观察好细胞状态后，75%酒精消毒瓶壁将细胞培养瓶置于37℃培养箱静置2-4 h，以便稳定细胞状态。 3.仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息，如细胞形态、生长特性、所用培养基、血清比例、所需细胞因子、传代比例等，确保细胞培养条件一致，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题，责任由客户自行承担(客户需咨询其培养条件是否与我们一致)。 4.静置完成后，取出细胞培养瓶，镜检、拍照，记录细胞状态(所拍照片将作为后续服务依据)。 5.稳定细胞状态后建议直接进行实验或消化传代，不需要进行换液后再传代(操作不当易导致细胞状态差)。 6.小鼠肝脏Kupffer细胞体外培养周期有限，建议使用配套的专用培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。 7.建议进行细胞培养后，前3天定期拍照，记录细胞状态，若观察到异常或对细胞有疑问，请及时与代理商或我们联系。对于细胞培养操作及培养注意事项有疑问的，可与我们的技术支持交流。

原代细胞培养常见问题

如何判断原代细胞衰老了

1.形态学的观察，细胞突起变大、或细胞扁平;2.β半乳糖苷染色判断细胞是否衰老;3.增殖速率明显下降;4.对相关的标志物进行检测。

如何确保分离的原代细胞的活性

1.组织离体时间不能太久;2.低温冰上分离，但也不能直接从-80℃冰箱上取出一块冰;3.无菌操作体系;4.消化酶的浓度和消化时间的把控。

原代细胞可以无限的增殖

与细胞系不同，原代细胞具有有限的扩增能力。建议尽早使用原代细胞进行实验以防止遗传漂移。此外，如果你正在使用一个增值困难的细胞类型，你应该密切监测细胞形态，因为少量混杂的细胞(如成纤维细胞)可能随着时间的推移，大量生长从而成为主要细胞。

如何让原代细胞一直保持增殖能力

原代细胞传代有限，可以通过构建永生化细胞株使其获得无限增殖的能力，即转变为永生化细胞系。

原代细胞一般第几代做实验比较好

5代以内，3代最好。有些细胞比如特殊，如神经元、巨噬为终末分化细胞，增殖能力很弱，建议客户收到细胞请镜下观察细胞生长状态后直接用于后续实验，不建议传代进行扩增培养和冻存。

原代细胞可以冻存吗？冻存复苏后活率差的原因是什么?

这取决于细胞的类型。一些细胞类型像神经细胞，神经胶质细胞和一些生长缓慢的上皮细胞，不推荐扩增培养和再次冻存。其它的细胞类型像成纤维细胞、星形细胞、肾系膜细胞、星形胶质细胞等等，可以扩增培养和再次冻存。然而，需要注意的是再次冻存的过程可能导致细胞生长性能的改变。冻存后复苏活率低需要考虑冻存前细胞活性，细胞量以及冻存体系，冻存体系是指用的含血清的冻存液，还是一步冻存液，不同冻存方法对应的操作方法不同需要注意。

通常我们不推荐重新冻存原代细胞，因为这可以促进细胞衰老和/或导致功能变化。原代细胞非常敏感，重新冻结可能导致细胞死亡或损伤。

贴壁的原代细胞很难消化是怎么回事

细胞初代培养时在细胞皿上培养的时间过长，解决方法可以将酶的浓度降低，37℃培养箱中延长消化时间，或者分步消化。

原代上皮细胞传代之后形态发生变化

上皮细胞，传代容易变形，上皮细胞传代后，不容易再次贴壁，这个时候可以使用代膜的培养瓶或者瓶子包被一下(基质胶，鼠尾胶原，多聚赖氨酸等)都可以，上皮细胞，传代非常有限，且生长比较慢，一般建议尽快实验，不适合长时间去大量扩增培养。

因原代细胞体外传代有限，传代次数皆为大部分人使用后的平均数据，受操作手法，培养环境，培养条件等因素综合影响，建议收到后，尽快完成实验，不建议反复冻存一直传代扩增。

提取原代细胞经常发生污染可以怎样改善

首先要确保细胞分离实验室是否存在细菌污染，如果存在问题，需要将实验室进行消毒，培养箱灭菌，检查试剂耗材是否可用，第二个就是注意无菌操作，保证试剂、剪刀镊子等无菌，第三是可以在培养液中加抗生素，双抗、两性霉素等。

原代细胞售后规定

1.细胞运输途中遭遇的各种问题，细胞丢失、瓶身破损、培养液严重漏液，细胞未开封，如出现污染状况等，重发

2.客户操作造成细胞污染，细胞状态不好，非我司推荐细胞培养体系，未提供真实清晰的培养前3天的细胞状态照片，不重发

3.原代细胞不建议客户自行冻存，收货后及时传代并安排实验，超出代数的细胞可能出现突变、状态变差等现象导致细胞无法进一步传代或者进行实验，对于自行冻存的细胞一律不予免费售后

小鼠肝kupffer细胞（免疫荧光鉴定报告）

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