小鼠肝胆管（扩增）类器官标准株

1). 提前在 37℃条件下预热类器官专用基础培养基。

2). 在 37℃的水浴中快速解冻细胞冻存管，当冻存管内冻存物仅剩些许冰渣残留时立即停止水浴并及时转移至洁净操作台。

3). 将细胞悬液转移至离心管中，缓缓加入5-10倍体积的类器官专用基础培养基，轻轻混匀。

4). 200 g，离心3-5 min，弃上清，再次加入类器官专用基础培养基重悬细胞沉淀。

5). 再次加入类器官专用基础培养基重悬细胞沉淀，重复步骤4。

6). 弃上清后所获细胞沉淀可用于后续类器官培养。

1). 用移液枪吹打破坏基质胶，并将类器官悬液转移到离心管中。

2). 用移液枪吹打使类器官悬浮液充分混合。

3). 在室温下300 g离心3分钟。

4). 抽吸上清，使用机械破坏或类器官消化液分离类器官。

a. 对于机械破坏，将类器官重悬在1 ml类器官专用基础培养基中。用移液管尖端将类器官悬浮液上下移动30次。用管子底部制造压力，这将有助于类器官的破坏。

b. 类器官消化液消化，将基质胶和类器官混合物重悬于类器官传代消化液中(10倍体积)，吹打混匀，37℃孵育3～10 min至类器官分离。每2分钟用移液枪吹打10次，密切监测消化，以保持在类器官解离溶液中的孵育时间最短。

5). 解离完成后，加1 mL 基础培养基洗一次，室温下300 g离心3分钟。

6). 抽吸上清，用70% 的基质胶重悬类器官，类器官胶滴接种在培养板底部。将孔板板转移到37°C和5% CO2的培养箱中15-25分钟。

7). 37℃预热小鼠肝胆管类器官扩增培养基。

8). 在基质胶凝固后(15-25分钟)，小心地将预热过的培养基加入孔板中。

9). 将培养板置于37°C和5% CO2的培养箱中静置培养，每天于显微镜下观察类器官的生长状态，每3天于显微镜下拍照并记录多个视野中的类器官的形态。

1. 收到细胞后首先观察细胞冻存管是否完好，冻存液是否有解冻现象，若有上述现象发生请及时和我们联系。

2. 仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息，如细胞形态、所用培养基、所需细胞因子等，确保细胞培养条件一致，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题，责任由客户自行承担。

3. 用75%酒精擦拭冻存管表面，之后进行细胞复苏步骤。若暂不复苏，应立即将冻存管转移至液氮罐中长期保存。

4. 客户可购买类器官专用基础培养基(IMV-A010)；小鼠肝胆管(扩增)类器官完全培养基(货号IMV-NM04)。

5. 建议客户复苏细胞后前3天各拍几张细胞照片，记录细胞状态，便于和我司技术部沟通交流。由于运输的原因，个别敏感细胞会出现不稳定的情况，请及时和我们联系，告知细胞的具体情况，以便我们的技术人员跟踪回访直至问题解决。

6.该细胞仅供科研使用。

1.收到细胞后，首先观察并拍照记录细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液、浑浊等现象，干冰运输的细胞检查干冰是否完全挥发，细胞是否解冻，若有上述现象发生请及时和我们联系。

2.静置完成后，取出细胞培养瓶，镜检、拍照(当天以及第 2,3 天请拍照)，记录细胞状态 (所拍照片将作为后续服务依据);建议细胞传代培养后，定期拍照、记录细胞生长状态。

3.由于运输的原因，部分细胞由于温度变化及剧烈碰撞死亡破碎形成碎片，是正常现象。个别敏感细胞会出现不稳定的情况，请及时和我们联系，告知细胞的具体情况，以便我们的技术人员跟踪回访直至问题解决。

4.仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息，如细胞形态、所用培养基、血清比例、所需细胞因子等，确保细胞培养条件一致，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题，责任由客户自行承担。