小鼠表皮类器官标准株

产品概述

小鼠表皮类器官标准株来源于小鼠体内表皮组织，极大程度维持了来源于体内 表皮组织的特征，是表皮相关疾病机制研究的理想体外模型。

细胞培养操作

1. 复苏细胞：

1). 提前在 37℃条件下预热类器官专用基础培养基。

2). 在 37℃的水浴中快速解冻细胞冻存管，当冻存管内冻存物仅剩些许冰渣残留时立即停止水 浴并及时转移至洁净操作台。

3). 将细胞悬液转移至离心管中，缓缓加入 5-10 倍体积的类器官专用基础培养基，轻轻混匀。

4). 200 g ，离心 3-5 min ，弃上清，再次加入类器官专用基础培养基重悬细胞沉淀。

5). 再次加入类器官专用基础培养基重悬细胞沉淀，重复步骤4。

6). 弃上清后所获细胞沉淀可用于后续类器官培养。复苏后，培养前四天可额外在培养基中添 加 y27632(IMC-014-Y)提高类器官存活率，终浓度为 10 uM。

2. 细胞传代：

1). 去胶：用经过类器官抗粘附液(IMV-A003)润洗的枪头吹打刮取类器官，并将类器官和培 养基悬液转移至经过润洗液润洗的 1.5 mL EP 管中。 用经过润洗液润洗的枪头用力重悬类器 官悬浮液，多次吹打使得类器官与基质胶分离。

注意：移取类器官前枪头都应用类器官抗粘附液润洗，以减少类器官损失。后续不再特意注 明。

2). 消化： 300 g 离心 3 min，弃上清，加入 10 倍体积的类器官传代消化液并充分混匀，37℃ 条件下消化孵育3～10 min 至类器官分散。消化结束后加入适量类器官专用基础培养中止消化。 300 g 离心 3 min。

3). 清洗：弃上清，加入 1 mL 类器官专用基础培养基重悬。300 g 离心 3 min。

4). 铺胶：用适量类器官专用基础培养基重悬细胞沉淀(推荐加入 10 倍沉淀体积)，置于冰上 预冷，加入适量基质胶(IMV-A017)混匀配置成 70%胶浓度的细胞-培养基-基质胶混合液， 点入 24 孔板底部正中央，每孔 30μL 左右，避免悬液接触孔板侧壁。

注意：此步骤速度要尽可能快，避免基质胶温度升高而凝固;吹打时注意不要产生气泡。

5). 凝胶：将接种完成后的培养板至于 37℃二氧化碳恒温培养箱中，孵育 30 min 左右待基质 胶凝固。

6). 加入培养基：待基质胶完全凝固后，沿壁缓慢加入已配制好的小鼠表皮类器官完全培养基， 24 孔板每孔 500 μL ，避免破坏已凝固结构。传代培养前四天可额外在培养基中添加 y27632 (IMC-014-Y)提高类器官存活率，终浓度为 10 uM。

7). 将 24 孔板置于 37℃二氧化碳培养箱中培养，每 3~4 天更换培养基，直到类器官需要进 一步的实验。

培养注意事项

1. 收到细胞后首先观察细胞冻存管是否完好，冻存液是否有解冻现象，若有上述现象发 生请及时和我们联系。

2. 仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息，如细胞形态、所用培养基、所需细胞因子 等，确保细胞培养条件一致，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题，责任由客户自行承 担。

3. 用 75%酒精擦拭冻存管表面，之后进行细胞复苏步骤。若暂不复苏，应立即将冻存管 转移至液氮罐中长期保存。

4. 客户可购买逸漠生物类器官专用基础培养基(IMV-A010);小鼠表皮类器官完全培养 基(货号 IMV-NM23)。

5. 建议客户复苏细胞后前3 天各拍几张细胞照片，记录细胞状态，便于和我司技术部沟 通交流。由于运输的原因，个别敏感细胞会出现不稳定的情况，请及时和我们联系，告知细胞 的具体情况，以便我们的技术人员跟踪回访直至问题解决。

6.该细胞仅供科研使用。