Dispase II 分散酶II

产品简介

Dispase II，中文名分散酶II，一种非特异性金属蛋白酶，细胞生物学中常用于从不同的组织或器官分离单细胞，并用于后续细胞培养，如原代细胞的分离，细胞传代等。另外，Dispase II还可用于消除悬浮细胞培养过程中发生的细胞聚集。与其他细胞生物学常用蛋白酶(如胰蛋白酶、胶原酶、链霉蛋白酶等)相比，该酶具有以下优势：1)一种快速有效且温和的细胞消化酶，对细胞损伤小，且能维持细胞膜完整性;2)来源于细菌，无支原体或其他动物病毒污染;3)稳定性强，不受温度、pH及血清组分的影响;4)可用于多种类型组织和细胞的分离等。

本品非无菌Dispase II，来源于Bacillus polymyxa，使用时需对其除菌处理，用于细胞培养时常用工作浓度为0.6-2.4 U/mL。

产品信息

酶活力单位定义

在37℃，pH7.5 的条件下，每分钟水解酪蛋白释放出相当于1 µM(181 µg)酪氨酸的福林阳性氨基酸和肽所需要的酶量，即为一个蛋白酶活性单位，以U表示。

Dispase II 分散酶II使用说明

1.Dispase II储存液的配制

(1)用Hepe缓冲盐溶液(50 mM Hepes/KOH pH7.4, 150 mM NaCl)溶解适量本品冻干粉，配制成10 mg/mL的储存液，用0.22 µM滤膜过滤除菌。

(2)使用时用适当细胞培养液将上述储存液稀释到工作液浓度即可，用于细胞分离时其常用工作浓度为0.6-2.4 U/mL。

注：不推荐使用高于2.4 U/mL的工作浓度。

2.组织的解离

(1)用无菌的小刀或者剪刀将组织剪成合适大小的组织块;

(2)用无菌PBS清洗组织块;

(3)向上述组织块中加入Dispase II溶液(工作浓度为0.6-2.4 U/mL)，并确保组织块全部浸没于Dispase 溶液中。

(4)37℃孵育，孵育过程缓慢搅拌直至组织块全部解离。注：若第一次使用该酶，可通过细胞计数来确定需要的总孵育时间。一般对于较难解离组织，1h即可达到分离目的，但更长时间(如数小时)的孵育也不会明显影响细胞活性。

(5)如有需要，可将上述消化产物通过无菌不锈钢网筛过滤，以分开单细胞与残留的组织块。或者待大块组织沉淀后轻轻倒出上层细胞，若是需要，换用新鲜dispase溶液以进一步解离残留组织。

(6)离心沉淀细胞，倒掉酶溶液;

(7)用培养基重悬细胞沉淀，并于常规条件下培养细胞。

3. 细胞传代

(1)利用Dispase 溶液(37℃预热)浸没细胞，于37℃孵育5 min;

(2)吸除上述溶液，继续于37℃孵育10 min;

(3)显微镜下观察细胞分离情况，如需要，可进一步孵育15 min;

(4)利用细胞培养基悬浮细胞，轻轻旋转使得细胞沉淀并用培养基清洗细胞;

(5)换用新鲜细胞培养液重悬细胞，并按常规方法进行细胞铺板。

Dispase II 分散酶II注意事项

1.储存液于4℃可稳定保存2周，若长期保存，请分装后于-20℃冻存，2个月有效。避免反复冻融。

2.本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。

3.为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

本产品仅用于科研用途，不可用于诊断、治疗、临床、家庭及其他用途。