4T1细胞用什么培养基及培养方法

4t1细胞是什么细胞

4T1细胞是从410.4瘤株中未经诱变筛得的6-硫鸟嘌噙抗性细胞株。当4T1细胞注射到BALB/c小鼠中时，4T1细胞会自发产生高转移肿瘤，可转移到肺、肝、淋巴结和大脑，同时在注射部位形成始发灶，诱导转移时不需要摘除始发灶。4T1细胞在BALB/c小鼠中的生长与转移特性与人体中的乳腺癌十分相近，这种肿瘤是人Ⅵ期乳腺癌的动物模型。4T1细胞诱导的肿瘤在手术后及未手术情况下转移的动力学相近，可以用作手术后及未手术模型。4T1细胞诱导的肿瘤模型跟其他肿瘤模型相比，由于4T1细胞的抗6-硫鸟嘌噙特性，微小的转移细胞团(少到仅仅1个)也可以在许多远端器官中检测到，没必要数淋巴结或称重器官。

小鼠乳腺癌细胞4T1形态

逸漠细胞库4T1细胞图片

4T1细胞用什么培养基及培养方法

4T1细胞培养实验准备

提前开启紫外照射30min消毒灭菌，工作台开灯通风10min，用75%酒精擦拭台面。

器材耗材：玻璃瓶、培养瓶、培养皿、巴士管、离心管、移液枪、枪头(白色0-10ul;黄色20-200ul;蓝色100-1000ul)、滤器、吸管、多孔培养皿、6cm皿、10cm皿，培养瓶等。

试剂：DMEM培养液、缓冲液、PBS、消化液、血清、抗生素。

4T1细胞培养条件

形态特征：上皮细胞样，贴壁生长

培养基： 90%DMEM+10% FBS+PS

生长条件：气相：95%空气+5%二氧化碳;温度：37℃

传代方法：1:2至1:3，每周 3次

冻存条件：无血清冻存液(或者冷冻保存液：90%血清，10%DMSO，现用现配)，液氮储存

4T1细胞培养注意事项

1.运输4T1细胞用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的完全培养基来培养细胞。请客户用相同条件的培养基用于细胞培养。

2.收到4T1细胞后第一次传代建议1：2传代 。注意： 1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿。不是1个T25瓶传2个10cm皿。

4T1细胞养操作步骤

4T1细胞复苏方法

1.将含有1 mL4T1细胞悬液的冻存管在 37℃水浴中迅速摇晃解冻，加4 mL培养基混合均匀;

2.在1000 rpm条件下离心3 min，弃去上清液，加1-2 mL培养基后轻轻吹匀;

3.将所有4T1细胞悬液加入含适量培养基的培养瓶中培养过夜(或将细胞悬液加入6 cm皿中，加入约4 mL培养基，培养过夜);

4.第三天换液并检查4T1细胞密度。

4T1细胞传代方法

如果4T1细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。

1.弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。

2.加1 mL消化液(0.25%Trypsin-0.02% EDTA)于培养瓶中，使消化液浸润所有细胞，将培养瓶置于37℃培养箱中消化1 -3min(视细胞消化情况而定)，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加2-3ml完全培养基终止消化。轻轻打匀后装入无菌离心管中，1000 rpm离心5 min，弃去上清液，补加1-2 mL培养液后吹匀。

3.将细胞悬液按1:2比例分到新的含8 mL培养基的新皿中或者瓶中，置于培养箱中培养。

4T1细胞冻存方法

待4T1细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。下面 T25 瓶为例

1.收集4T1细胞及细胞培养液，装入无菌离心管中，1000 rpm条件下离心4 min，弃去上清液，用PBS清洗一遍，弃尽PBS，然后进行细胞计数。

2.根据4T1细胞数量对应加入无血清细胞冻存液，使细胞密度5×106~1×107/mL，轻轻混匀，每支冻存管冻存1mL细胞悬液，注意冻存管做好标识。

3.将冻存管放入-80℃冰箱，24 h后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。

4T1小鼠乳腺癌细胞培养常见问题

1.4T1小鼠乳腺癌细胞出现细胞团怎么处理?

4T1细胞团比较重，低离没有用，贴的不牢就Pbs洗一下，用巴氏管吹不能用枪头。这种不影响细胞生长，不处理也行。

2.4T1细胞消化时间是建议多久呢?

4T1放培养箱5分钟左右镜下观察在终止，4T1细胞是易脱落也易报团，所以不能看细胞脱落了就终止，要多消化一下。

3.4T1小鼠乳腺癌细胞培养注意事项?

a.4T1细胞生长速度快，细胞汇合度越高越难消化，建议分次消化。一次消化至有细胞移动漂浮时终止，再进行二次消化剩余的细胞，尽量消化成单颗细胞，细胞传代第二天有少量细胞团贴壁未展开为正常现象，继续培养细胞会展开;

b.若在培养时出现细胞变圆现象，有可能是细胞密度过大，无法展开的原因，可通过降低传代密度来改善。

4.4T1小鼠乳腺癌细胞培养过程中细胞变得瘦长?

可能细胞密度过大，没有及时换液，可以血清多补加5%看下。

5.小鼠4T1细胞不长怎么处理?

这些因素都会影响细胞长得慢：a.没有保证密度，细胞长不起来;b.操作时力度没控制好，将细胞吹碎，状态变差;c.血清质量不好，影响细胞生长。

6.4t1细胞形态特征?

4T1细胞形态特征为上皮细胞样，贴壁生长。

7.4t1细胞用高糖DMEM吗?

是的，用高糖DMEM。

8.4T1细胞能成瘤吗?

Yes，forms tumors and metastasizes in BALB/c mice.

9.小鼠4T1细胞传代密度是多少?

4T1细胞建议在生长至80%汇合度时即应传代，以免细胞状态变差。

10.4T1细胞培养出现小黑点，怎么处理?

如果在显微镜下观察到了小黑点，基本上可以将范围缩小到是细菌污染或者细胞碎片这两种情况。

到底是污染还是碎片，可从以下几个方面进行判断：

1) 运动性

很多会动的小黑点，只是发生布朗运动的细胞碎片。在显微镜下观察黑点大小和形状是否规则，是否运动，是做布朗运动还是呈直线型快速移动。如果黑点大小不规则，做布朗运动，黑点可能是细胞碎片(可能是细胞状态不佳或者消化过度引起的)，也可能是血清反复冻融产生的蛋白沉淀引起的，也可能是细胞的代谢产物。

处理方法：消化离心弃上清后，PBS重悬洗洗，750rpm低速离心4分钟，重新铺下，铺回去镜下观察一下是不是干净的

如果黑点大小一致，快速移动，很可能是细菌污染。

2)培养基的浑浊度

如果在显微镜下无法辨认，那就交给时间吧。细胞培养基对于细菌来说是非常营养的大餐。一旦发生污染，细菌就会大量繁殖。培养基PH值迅速下降，培养基变黄且会变浑浊。通常在12小时内就可以发现，而在48小时内就非常明显。

4T1细胞在研究中的应用

4T1是一种可移植的小鼠乳腺癌细胞系。它被广泛地用作体外肿瘤模型，用于研究人类乳腺癌。4T1细胞有高度的侵袭性和肿瘤形成能力；它们倾向于从乳腺的原发肿瘤部位转移至其他部位，包括肝脏、淋巴结、肺、骨骼和脑部，因此是研究乳腺癌转移的理想选择。

4T1是一种乳腺肿瘤细胞系，起源于BALB/c小鼠的自发性乳腺肿瘤。这些高度侵袭性和肿瘤原性的细胞在生长和转移扩散方面，与人类乳腺癌的行为非常相似。具体而言，4T1肿瘤模型研究三阴性乳腺癌(TNBC)。

4T1小鼠乳腺癌细胞是从410.4瘤株中未经诱变筛得的6-硫鸟嘌噙抗性细胞株，它的高肿瘤发生率和存活率使其成为动物水平乳腺癌研究的理想细胞模型。

乳腺癌是全球女性最常见的癌症之一，对公众健康构成了严重威胁。在多种乳腺癌亚型中，4T1小鼠乳腺癌细胞的生物学特性及肿瘤转移潜能引起了科研人员的特别关注。4T1细胞来源于410-6乳腺癌细胞，其能在BALB/c小鼠中产生自发性的肺转移，这一特性使其在研究乳腺癌转移机制及探索新型治疗策略方面成为一个有价值的模型。

4T1小鼠乳腺癌细胞具有高度的侵袭性和转移潜能，其通过激活Src通路、诱导上皮间质转化(EMT)以及引发免疫逃避等机制促进肿瘤转移。此外，4T1细胞还能产生大量的炎性细胞因子，如IL-6、IL-8和MCP-1，从而引发炎症反应，进一步促进肿瘤的生长和转移。

4T1细胞在癌症治疗中的应用

4T1细胞的自发性转移能力使其在癌症治疗研究中具有很高的价值。例如，研究人员可以利用4T1细胞建立乳腺癌原位模型，然后评估各种药物对肿瘤生长和转移的抑制效果。由于4T1细胞能引发强烈的炎症反应，研究人员也可以利用其探索炎症在肿瘤进展中的作用，以及探索如何通过抑制炎症来抑制肿瘤的生长和转移。

此外，4T1细胞还能用于研究肿瘤免疫逃逸的机制以及探索免疫治疗在乳腺癌治疗中的应用。例如，通过敲除某些免疫相关的基因，研究人员可以观察到肿瘤免疫微环境的改变，进而研究这些改变对肿瘤生长和转移的影响。

4T1细胞提供了一种研究乳腺癌转移的模型，可以用来研究乳腺癌的发病机制、预测癌细胞的侵袭性和研究针对乳腺癌的治疗方法。4T1细胞的转移特性使其成为研究肿瘤治疗新药的理想模型，因为它们可以向不同的器官转移，这是许多其他肿瘤细胞系所缺乏的。

近年来，基于4T1细胞的乳腺癌转移模型已经被广泛应用于研究抗癌治疗的新药物，包括免疫治疗、靶向治疗等新型治疗方法。这些治疗方法都是通过抑制或干扰肿瘤细胞的生长、分化或扩散，来阻止肿瘤的发展和转移，从而提高患者的生存率。