293人胚肾细胞培养方法和技术

293细胞是人肾上皮细胞系，有多种衍生株，比如HEK293，293T/17等，来源都是人胚胎肾细胞，其极少表达细胞外配体所需的内生受体，且比较容易转染，是一个很常用的表达研究外源基因的细胞株。

293人肾上皮细胞系背景简介

HEK293 细胞是人类胚胎肾细胞，起初由荷兰生物学家 Alex Van der Eb 在 1970 年代初期分离和培养。Van der Eb 实验室的博士后 Frank Graham 用剪切的腺病毒 5 (Ad5) DNA 进行转染 。这是他们的第 293 次实验，所以就命名该细胞系为 HEK293 ，细胞系的主要作用是通过细胞的基因改造实现重组蛋白合成。

产品基本信息

细胞名称：HEK293，人肾上皮细胞系

种属来源：人

组织来源：胚胎肾

细胞形态：上皮细胞样

生长特性：贴壁生长

培养基：90% DMEM+10% FBS+PS

生长条件：气相：95%空气+5%二氧化碳;温度：37℃

传代方法：1:2至1:3，每周 2-3次

冻存条件：无血清冻存液，液氮储存

特别注意：293细胞贴壁不牢，运输过程中细胞会有脱落，如细胞脱落，请离心收集，消化后重新铺瓶。

293细胞培养(cellculture)技术

1.293细胞明显适应酸性环境，pH值在6.9～7.1时,可顺利贴壁生长, 换液时动作要轻。一般用高糖的DMEM培养基。

2.传代：倒去废液，PBS洗一次(轻)，用0.02%EDTA与0.25%Trypsin消化，生长良好细胞，培养瓶中轻摇,使之流遍所有细胞表面,即将其吸除或弃去消化30s，然后吸去，再让剩下的EDTA/Trypsin作用30s，镜下观察细胞变圆,就可加DMEM终止消化，反复吹打至细胞全成单个悬浮细胞即可。12小时-24小时90%以上细胞贴壁。293细胞传代时机为达80-90%汇合，传代比例为1：2。

3.293细胞在低代时容易贴壁，生长良好，在传到几十代以后，易聚集成团，且贴壁不牢，用PBS冲洗时即可能脱落，即使消化后也不容易吹打成单细胞悬液，最好购入时先大量冻存。

4.复苏293细胞的另一生长特性是贴壁所需时间长且贴壁不牢。细胞冷冻后复苏时,都有不同程度的肿胀,若以50ml培养瓶待细胞长满瓶底的 70%～80%时消化冻存，复苏时将其全部接种至2个50ml瓶中时较为合适。刚复苏的293贴壁很慢，复苏接种后24小时内，应尽量减少观察细胞次数或不作观察,以免因晃动而影响细胞贴壁。复苏后48小时左右观察贴壁情况并进行首次更换培养基比较合适,如果用一次性塑料培养瓶可增加细胞贴壁牢度。换液前宜将培养基预热。

293细胞培养经验

1.用大瓶培养较小瓶要好，可能是更有利于293均匀的分布，利于营养的摄取。

2.培养液要新鲜，每次只配1000ml，分为2-4瓶，不用的培养液，冻存在-20度。

3.要及时传代，最好是细胞基本铺满培养瓶底部，但是细胞之间还没有完全贴紧，总是多少有空隙的时候最好。

4.如果细胞贴壁不好，可能是消化过久，或是培养瓶不够干净，当然要除外细胞污染。

5.如果使用用玻璃培养瓶或皿，可以采用高压灭菌的0.2%明胶溶液预处理培养瓶/培养皿，方法是将明胶加入培养皿，使之浸泡到底面的各个部分，然后吸出，置超净台内晾干即可使用。这样处理后细胞贴壁效果好且镜下细胞立体感强。如果是新的塑料培养瓶就不用处理。