第一节:hESC细胞培养基质胶分装与铺板教程

本视频为厦门逸漠生物科技有限公司出品关于hESC细胞培养基质胶分装与铺板教程，我们对每一步操作都做了演示，以便科研老师更好地理解hESC细胞培养过程中基质胶分装与铺板实验过程。

hESC细胞培养教程之：基质胶分装与铺板

一.Corning Matrigel Matrix使用说明

Corning Matrigel Matrix是由Corning公司生产的，是干细胞培养中最常用的铺底基质之一；

Matrigel对温度十分敏感，仅在4℃呈液态；常温下形成基底膜三维胶质结构，需要干冰运输，-20℃或-80℃储存，注意颜色变化；

注意

收货：收货时，需要注意检查泡沫箱内干冰是否足量，Matrigel液面是否基本水平，以及瓶身侧壁，瓶口有无融化的痕迹；

储存：收货确认无异常后，将Matrigel储存于-20℃冰箱，长期保存可置于-80℃冰箱。切勿储存于冰箱外侧靠门边上，最好放置于内侧角落。

颜色：含酚红Matrigel冷冻状态下颜色为淡黄色/橙黄色，解冻后颜色为不同程度的红色；

常规冰箱温度波动较大，为了保证最佳使用效果，建议放在-80℃储存；第一次融化后请分装保存，避免反复冻融；

分装前，请根据收到的 Matrigel 批号查询此批号 Matrigel 的蛋白浓度（或Dilution Factor）；根据使用浓度（或Dilution Factor）和包被面积计算分装体积和数量。

使用货号为 354277 的 Matrigel（hESC-Qualified Matrigel），其操作说明中不标注蛋白浓度，而是以 Dilution Factor 表示，如某批次的推荐 Dilution Factor 为278 μL，则表明 278 μL 可包被 4块 6 孔板，分装数量=5 mL / 0.278 =17.98管。

二、分装 Matrigel

1.取一瓶冷冻的Matrigel，置于-4℃冰箱过夜，当Matrigel完全融化后即可开始分装；

2.准备1mL无菌吸头1盒，无菌的1.5 mL EP管若干，贴好标签（Matrigel批号，浓度，日期，操作人），放入EP冰盒上，均置于-20℃冰箱中预冷1小时以上；

3.完全融化的Matrigel为可流动的红色液体;从冰箱取出插入碎冰中；

4.将完全融化的Matrigel、预冷的1.5 mL EP管-冰盒，1mL无菌吸头转移生物安全柜内；

5.冰上混匀Matrigel，随后调整移液器刻度，准备分装；

6.分装时可用无菌剪刀将吸头尖端剪去一小段；每分装5管后更换新的吸头，以减少吸头堵塞的风险；

7.将混匀的Matrigel无菌分装于1.5 mL EP管（300 μl/管）中；将分装好的Matrigel转移至-20℃或-80℃冰箱保存；

三.Matrigel铺板

1.取1支冷冻的Matrigel，EP管放入冰盒中，置于4℃冰箱解冻；

2.准备1 mL 无菌吸头1盒，置于-20℃冰箱中预冷1小时以上；

3.准备1瓶冷藏的DMEM/F12，1支50 mL离心管，做上标记；

4.取36 mL DMEM/F12于50 mL离心管中，置于4℃冰箱备用；

5.1小时后，将完全融化的Matrigel、冷藏的DMEM/F12，预冷的1 mL 无菌吸头转移到生物安全柜内；

6. 取4快无菌的6孔板，置于生物安全柜内，做上标记；

7. 完全融化的Matrigel为可流动的红色的液体；

8. 取1mL DMEM/F12，加入完全融化的Matrigel中，反复吹打20次以上充分混匀，吸取混匀的Matrigel，可加入剩余的DMEM/F12中，洗涤一次EP管；

9. 使用10 mL移液管，反复吹打30次，充分混匀；

10. 混匀后按照1.5 mL/孔分装4块六孔板中，十字轻轻摇晃均匀；

11. 将培养板置于37℃培养箱，1小时后即可使用；或使用封口膜封口，随后置于4℃冰箱冷藏保存，两周内使用；

注意

1. 不同货号和批号的Matrigel，浓度会有区别，具体请查询COA文件；

2. 切勿将Matrigel储存于自动除霜的冰箱中;在第一次融化后请分装保存，避免反复冻融；

3. Matrigel对温度十分敏感，与Matrigel接触的所有试剂耗材（离心管，移液枪头等）均需事先预冷，操作需全程在冰上进行；

4. 包被的Matrigel时需要充分混匀，切勿将解冻后的Matrigel直接加入到DMEM/F12中混匀，会因混匀不充分而导致包被不均匀，进而影响培养效果；

5. 包被好的Matrigel培养板，可在4℃保存2周，使用时提前置于室温恢复30分钟以上即可使用。