C2C12 成肌细胞成肌管诱导分化培养基试剂盒

产品介绍

C2C12成肌细胞成肌管诱导分化培养基试剂盒是厦门逸漠生物科技有限公司研发技术团队开发的一种适用于C2C12成肌细胞分化成肌管的培养，包含适合C2C12成肌细胞生长的专用培养基、分化培养基、诱导细胞分化所需的添加物及染色液。 本产品适用于C2C12成肌细胞的成肌管诱导分化。大量细胞培养数据验证，本产品可稳定、高效诱导上述细胞分化为成肌管细胞。

注意：本产品仅提供给进一步科研使用，不可用于临床治疗等其他用途。

C2C12 小鼠成肌细胞成肌管诱导分化培养基试剂盒套装成分

试剂盒套装成分	货号	体积
C2C12 小鼠成肌细胞成肌管诱导分化培养基试剂盒	IMC-017	1 Kit
C2C12 小鼠成肌细胞专用培养基	IMC-M020-1	100 mL
C2C12 小鼠成肌细胞分化培养基	IMC-M020 DM	100 mL
C2C12 小鼠成肌细胞分化添加物A	IMC-M020 SA	100 mL
Giemsa染色液A	IMC-017-G1	12 mL
Giemsa染色液B	IMC-017-G2	24 mL

质量控制

通过细菌、真菌、支原体、内毒素检测。

通过渗透压、pH检测。

通过产品性能检测

处理原则

1.严格的无菌环境。务必保证实验室整体和操作区域的清洁。

2.规范的操作方式。请按照产品说明书描述的方式操作，严格控制变量，做好对照实验。

3.各成分需按照保存条件妥善存放，并尽快使用。

4.若短期内无法用完整套培养基，应按套装内各成分体积比例现配现用。

产品稳定性及保存条件

1.套装内所有成分均需避光保存。

2. 套装内的完全培养基，需放置4℃保存，保质期为1个月;若能保证培养条件稳定，容器密封性能良好，避免冷热交替，则保质期可适当延长，但不得超过45天。

3.所有产品请于保质期内使用;过期的成分可能严重影响培养效果

分化培养基的配制

所需材料

1. C2C12成肌细胞成肌管诱导分化培养基试剂盒

2.清洁、无菌、质量稳定的一次性耗材(移液管、移液器吸头、离心管等)

3.洁净的封口膜

4.铝箔纸等避光材料

操作步骤

1.用75%医用酒精仔细擦拭所有成分外包装。在超净台内打开包装。

2.将添加物全部加入细胞基础培养基(以下简称基础培养基)中。

3.取少量基础培养基，洗涤各瓶、管，尽可能将所有成分全部加入基础培养基中。

4.拧紧基础培养基瓶盖，轻柔并充分摇匀。

5.用封口膜密封瓶口，用铝箔纸包裹瓶身，并标注名称、配制日期等信息。

特别提醒

1.若短期内无法用完全部培养基，我们建议分批配制;请按照套装内各成分比例，配制所需量;但剩余的成分必须严格按照各自的保存条件妥善保存，并且不可多次冻融。

2. C2C12成肌细胞成肌管诱导分化培养基试剂盒内的所有成分都严格控制无菌，一般情况下我们不建议再次除菌。若配制过程有污染风险，可将完全培养基过滤除菌。

3.配制完成的成肌诱导分化培养基，需在24h内使用。建议计算分化培养基用量，现用现配。

诱导分化操作流程

所需材料

1. C2C12成肌细胞成肌管诱导分化培养基试剂盒

2.Phosphate-BufferedSaline(1×PBS)

操作步骤

注意

1)本操作规程以十二孔板为例，请根据实际情况选用合适的培养容器;

2)为减少诱导过程细胞漂起、不贴壁，建议可使用明胶包被培养容器;

3)诱导培养基在使用前均需预热至37℃。

1.将待诱导的C2C12小鼠成肌细胞按照2×104cells/cm2的细胞密度接种于12孔板中，每孔加入1mL普通完全培养基。

2.细胞置于37℃、5%CO2、饱和湿度的CO2培养箱中培养。

3.当细胞融合度达到70%-80%时，小心地将孔内完全培养基吸走，向12孔板中加入1.0mL C2C12成肌细胞成肌管诱导分化培养基。

4.每隔1天换用新鲜的C2C12成肌细胞成肌管诱导分化培养基。

5.诱导3~7天后，视细胞的形态变化及生长情况，用Giemsa进行染色。

Giemsa染色分析

所需材料

1.Phosphate-BufferedSaline(1×PBS)

2.甲醇溶液

3. Giemsa染色液

操作步骤

注意：

1)为防止细胞脱落，所有操作尽可能轻缓;

2)如果染色效果较差，可适当延长染色时间;

3)请确认出现肌管后再进行染色。

1.成肌诱导分化结束后，吸去12孔板中的成肌诱导分化完全培养基，用1×PBS轻柔洗涤2~3次。

2.每孔加入0.5 mL1×PBS 之后并逐滴加入等体积的甲醇，室温固定5min。

3.吸去固定液，加入新鲜甲醇溶液固定细胞5min，然后使用甲醇溶液漂洗细胞1次。

4.吸取固定液，晾干培养板，使用Giemsa染色液进行染色。

5.加入100-200uL的Giemsa A液，浸泡1-2min;

6.加入两倍体积的Giemsa B液，继续浸泡5-7min;

7.去除染色液，加入PBS洗涤1-2次, 将培养板置于显微镜下观察成骨染色效果;

8.染色后的12孔板用封口膜封装后，置于4℃可保存2周