CDK1-Cyclin B1介导的VP1磷酸化有助于传染性法氏囊病病毒复制

基本信息

英文标题：Phosphorylation of VP1 Mediated by CDK1-Cyclin B1 Facilitates Infectious Bursal Disease Virus Replication中文标题：CDK1-Cyclin B1介导的VP1磷酸化有助于传染性法氏囊病病毒复制

发表期刊：《Journal of Virology》

影响因子：5.4

作者单位：江西农业大学动物科学技术学院兽医预防医学系、福建省农业科学院畜牧兽医研究所、江西农业大学动物科学技术学院

作者信息：Xifeng Hu, Zheng Chen, Xiangdong Wu, Zhen Ding, Hansheng Wu et al.

研究背景

传染性法氏囊病病毒(IBDV)是一种双链RNA病毒，属于Birnaviridae科Avibirnavirus属。它能够引起幼禽的严重疫苗失败和免疫系统受损。VP1蛋白的翻译后修饰对于病毒RNA转录、基因组复制和病毒增殖至关重要。然而，关于IBDV VP1磷酸化的确切机制及其在病毒生命周期中的意义，目前了解甚少。

研究方法

通过质谱分析、共免疫沉淀(co-IP)实验、GST融合蛋白下拉实验、体外激酶实验、病毒复制实验、RT-qPCR、Western blot等方法，研究了CDK1-Cyclin B1复合体与VP1的相互作用及其对VP1磷酸化的影响。使用CDK1抑制剂RO3306和siRNA敲低CDK1-Cyclin B1表达，研究其对IBDV复制的影响。通过点突变技术构建S7A VP1突变体，进一步研究S7位点磷酸化对VP1聚合酶活性及病毒复制的影响。

实验结果

图1：CDK1-周期蛋白B1复合物与VP1的相互作用。

图2：IBDV感染促进CDK1-周期蛋白B的表达。

图3：CDK1抑制剂损害IBDV复制。

图4：CDK1-周期蛋白B1沉默抑制病毒增殖

图5：CDK1-周期蛋白B1磷酸化VP1

图6：VP1的丝氨酸7是磷酸化位点。

图7：特定抗体识别VP1 S7磷酸化。

图8：VP1的磷酸化有助于其聚合酶活性。

图9：破坏VP1的磷酸化降低病毒复制。

研究结论

通过免疫沉淀和Western印迹分析发现，CDK1-Cyclin B1复合体与VP1蛋白特异性相互作用。

VP1蛋白在N末端的7SPAQ10区域的丝氨酸7位点上被CDK1-Cyclin B1复合体磷酸化。

IBDV感染促进CDK1-Cyclin B1在细胞质中的积累，并且与VP1蛋白共定位，这支持了CDK1-Cyclin B1激酶活性的发挥。

使用CDK1抑制剂RO3306处理细胞，显著破坏了VP1的聚合酶活性。

敲低CDK1-Cyclin B1的表达也显著破坏了VP1的聚合酶活性。

CDK1抑制剂RO3306和敲低CDK1-Cyclin B1表达都导致病毒复制减弱。

S7A突变的重组IBDV的复制能力显著下降，这表明S7位点的磷酸化对于VP1的聚合酶活性和病毒复制都是必需的。