兔主动脉瓣膜间质细胞（免疫荧光鉴定报告）

货号：IMP-RA177

规格：5x10⁵cells/T25或1mL冻存管

形态：梭形，多角形细胞样，贴壁生长

培养基：兔主动脉瓣膜间质细胞完全培养基

培养环境：气相：95%空气+5%二氧化碳；温度：37℃

传代比例：首次传代建议1：2传代，1:2传代是1个T25瓶传2个T25瓶或2个6cm皿

价格：¥5050

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背景介绍培养操作冻存步骤售后服务

背景简介

主动脉瓣施半月瓣，位于左心室和主动脉之间，抑制射入主动脉的血液回流入左心室。

主动脉瓣钙化可引起主动脉瓣狭窄关闭不全等，施导致老年退行性心瓣膜病的重要病理改变，其发病率随着年龄的增加而升高。有研究表明，瓣膜间质细胞向城固细胞样细胞表型转化有可能是主动脉瓣膜钙化的病理改变基础之一。

一、细胞基本属性
细胞名称	原代兔主动脉瓣膜间质细胞（免疫荧光鉴定报告）
种属来源	兔
组织来源	主动脉
生长特性	贴壁生长
形态特征	成纤维细胞样
质量检测	平滑肌肌动蛋白（α-SMA）或波形蛋白（Vimentin）免疫荧光染色为阳性，纯度高于 90%，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等
产品规格	5x10⁵cells/T25或1mL冻存管
培养基	兔主动脉瓣膜间质细胞完全培养基
培养条件	气相：95%空气+5%二氧化碳；温度：37℃
换液频率	每2-3天换液一次
消化液	0.25%胰蛋白酶
产品货期	2-3周左右
运输方式	复苏发货（T25瓶免运输费用）/ 冻存发货（需加干冰运输费用）顺丰快递
供应限制	仅限于科学研究，绝不可作为动物或人类疾病的治疗产品使用
特别说明	以下细胞培养冻存处理仅供参考，具体操作步骤以随货产品说明书为主
二、细胞培养操作
收货处理	取出T25细胞培养瓶，用75%酒精消毒瓶身，拆下封口膜，放入37℃、5%CO2，饱和湿度的细胞培养箱中静置3-4h，以稳定细胞状态
传代密度	细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养
传代比例	首次传代建议1：2传代，1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿。不是1个T25瓶传2个10cm皿
消化方法	1.吸出T25细胞培养瓶中的培养基，用PBS清洗细胞一次； 2.添加0.25%胰蛋白酶消化液1mL至T25培养瓶中，轻微转动培养瓶至消化液覆盖整个培养瓶底后，吸出多余胰蛋白酶消化液，37℃温浴1-3min；倒置显微镜下观察，待细胞回缩变圆后，再加入5ml完全培养基终止消化； 3.用吸管轻轻吹打混匀，按1:2比例接种T25培养瓶传代，然后补充新鲜的完全培养基至5mL，置于37℃、5%CO2、饱和湿度的细胞培养箱中静置培养； 4.待细胞完全贴壁后，培养观察；之后每2-3天换液一次新鲜的完全培养基。
备注：由于实验所用试剂、操作环境及操作手法的不同，以上方法仅供各实验室参考客户在细胞培养过程中，有任何技术问题可以拨打技术服务电话：400-080-3389 按 2，我们随时给予解答。
三、注意事项
重要提醒	1.培养基于4℃条件下可保存3-6个月。 2.在细胞培养过程中，请注意保持无菌操作。 3.传代培养过程中，胰酶消化时间不宜过长，否则会影响细胞贴壁及其生长状态。 4.运输用的培养基（灌液培养基）不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的完全培养基来培养细胞。
到货须知	1.收到细胞后，首先观察并拍照记录细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液、浑浊等现象，干冰运输的细胞检查干冰是否完全挥发，细胞是否解冻，若有上述现象发生请及时和我们联系。 2.静置完成后，取出细胞培养瓶，镜检、拍照（当天以及第 2,3 天请拍照），记录细胞状态 (所拍照片将作为后续服务依据)；建议细胞传代培养后，定期拍照、记录细胞生长状态。 3.由于运输的原因，部分细胞由于温度变化及剧烈碰撞死亡破碎形成碎片，是正常现象。个别敏感细胞会出现不稳定的情况，请及时和我们联系，告知细胞的具体情况，以便我们的技术人员跟踪回访直至问题解决。 4.仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息，如细胞形态、所用培养基、血清比例、所需细胞因子等，确保细胞培养条件一致，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题，责任由客户自行承担。
四、售后服务
重发标准	1.细胞运输途中遭遇的各种问题，细胞丢失、瓶身破损、培养液严重漏液等，重发； 2.收到细胞未开封，如出现污染状况，重发； 3.收到细胞3天内，发现污染问题，经核实后，重发； 4.常温发货的细胞静置 2 小时后，绝大多数细胞未存活，经核实后，重发； 5.常温发货的细胞静置 22 小时并且未开封，出现污染，经核实后，重发； 6.细胞活性问题，请在收到产品 3 天内给我们提出真实的实验结果，用台盼蓝染色法鉴定细胞活力，经核实后，重发； 7.视具体情况而定。
不予重发	1.客户操作造成细胞污染，不重发； 2.客户严重操作失误致细胞状态不好，不重发； 3.非我们推荐细胞培养体系致的细胞状态不好，不重发； 4.细胞状态不好，未提供真实清晰的培养前 3 天的细胞状态照片，不重发； 5.细胞培养时经其它处理导致细胞出现问题的，不重发； 6.收到细胞发现问题与客服人员沟通的时间证明大于3天的，不重发； 7.视具体情况而定。

原代细胞培养常见问题

如何判断原代细胞衰老了

1.形态学的观察，细胞突起变大、或细胞扁平;2.β半乳糖苷染色判断细胞是否衰老;3.增殖速率明显下降;4.对相关的标志物进行检测。

如何确保分离的原代细胞的活性

1.组织离体时间不能太久;2.低温冰上分离，但也不能直接从-80℃冰箱上取出一块冰;3.无菌操作体系;4.消化酶的浓度和消化时间的把控。

原代细胞可以无限的增殖

与细胞系不同，原代细胞具有有限的扩增能力。建议尽早使用原代细胞进行实验以防止遗传漂移。此外，如果你正在使用一个增值困难的细胞类型，你应该密切监测细胞形态，因为少量混杂的细胞(如成纤维细胞)可能随着时间的推移，大量生长从而成为主要细胞。

如何让原代细胞一直保持增殖能力

原代细胞传代有限，可以通过构建永生化细胞株使其获得无限增殖的能力，即转变为永生化细胞系。

原代细胞一般第几代做实验比较好

5代以内，3代最好。有些细胞比如特殊，如神经元、巨噬为终末分化细胞，增殖能力很弱，建议客户收到细胞请镜下观察细胞生长状态后直接用于后续实验，不建议传代进行扩增培养和冻存。

原代细胞可以冻存吗？冻存复苏后活率差的原因是什么?

这取决于细胞的类型。一些细胞类型像神经细胞，神经胶质细胞和一些生长缓慢的上皮细胞，不推荐扩增培养和再次冻存。其它的细胞类型像成纤维细胞、星形细胞、肾系膜细胞、星形胶质细胞等等，可以扩增培养和再次冻存。然而，需要注意的是再次冻存的过程可能导致细胞生长性能的改变。冻存后复苏活率低需要考虑冻存前细胞活性，细胞量以及冻存体系，冻存体系是指用的含血清的冻存液，还是一步冻存液，不同冻存方法对应的操作方法不同需要注意。

通常我们不推荐重新冻存原代细胞，因为这可以促进细胞衰老和/或导致功能变化。原代细胞非常敏感，重新冻结可能导致细胞死亡或损伤。

贴壁的原代细胞很难消化是怎么回事

细胞初代培养时在细胞皿上培养的时间过长，解决方法可以将酶的浓度降低，37℃培养箱中延长消化时间，或者分步消化。

原代上皮细胞传代之后形态发生变化

上皮细胞，传代容易变形，上皮细胞传代后，不容易再次贴壁，这个时候可以使用代膜的培养瓶或者瓶子包被一下(基质胶，鼠尾胶原，多聚赖氨酸等)都可以，上皮细胞，传代非常有限，且生长比较慢，一般建议尽快实验，不适合长时间去大量扩增培养。

因原代细胞体外传代有限，传代次数皆为大部分人使用后的平均数据，受操作手法，培养环境，培养条件等因素综合影响，建议收到后，尽快完成实验，不建议反复冻存一直传代扩增。

提取原代细胞经常发生污染可以怎样改善

首先要确保细胞分离实验室是否存在细菌污染，如果存在问题，需要将实验室进行消毒，培养箱灭菌，检查试剂耗材是否可用，第二个就是注意无菌操作，保证试剂、剪刀镊子等无菌，第三是可以在培养液中加抗生素，双抗、两性霉素等。