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原代人脐带间充质干细胞MSC(免疫荧光鉴定报告)

货号:IMP-H122 来源:IMMOCELL

规格:5×105cells/T25或1mL冻存管

形态:梭形不规则细胞,贴壁生长

培养基:人脐带间充质干细胞专用培养基

培养条件:气相:95%空气+5%二氧化碳;温度:37℃

价格:¥6150

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产品简介

脐带间充质干细胞是一种能分化成骨细胞、脂肪细胞和软骨细胞的多能干细胞。其具有强大的增殖能力,且参与构成造血微环境,因此被广泛应用于组织工程,细胞治疗和基因治疗。

人脐带间质干细胞取自健康足月分娩孕妇的脐带,其拥有强大的自我更新能力并具有多向分化潜能。 脐带是哺乳类的连接胎儿和胎盘的管状结构。原来是由羊膜包卷着卵黄囊和尿膜的柄状伸长部而形成的。脐带中通过尿膜的血管即脐动脉和脐静脉,卵黄囊的血管即脐肠系膜动脉及脐肠系膜静脉。当卵黄囊及其血管退化,脐动脉和脐静脉就发达起来,在这些间隙中可以看到疏松的胶状的间充质。在子宫中,子宫动脉在胎盘的母体部分出的毛细血管,与胎盘的子体部胎儿毛细血管靠近,在此处母体和胎儿的血液间进行CO2和O2,代谢产物即代谢废物和营养物质的交换。脐动脉将胎儿来的废物运送至胎盘,脐静脉将O2和营养物质从胎盘运送给胎儿。最后由子宫静脉将来自胎儿的代谢废物运走,某种激素和抗体等也通过脐带从母体移交给胎儿。脐带中含有大量的干细胞,干细胞是生命的种子,它会分化成机体的各种细胞,结出各种不同的果实——血液细胞、神经细胞、骨骼细胞等。

干细胞是具有自我更新、高度增殖和多项分化潜能的细胞群体;这些细胞可以通过分裂维持自身细胞的特性和数量,又可进一步分化为各种组织细胞,从而在组织修复等方面发挥积极作用。间充质干细胞(MSC)是一种具有高度自我更新和多向分化潜能的干细胞。

在不同的诱导条件下,可分化为多种造血细胞以外的组织细胞,并具有造血支持、免疫调节、组织修复等作用;目前,多用于风湿免疫疾病的治疗。间充质干细胞(MSCs)是一种具有自我更新和多向分化潜能的成体干细胞,存在于骨髓、脂肪组织、脐血及多种胎儿组织。它可分泌多种细胞因子及生长因子,促进造血干细胞(HSC)的增殖与分化。MSCs还具有免疫调节、抗炎和组织修复作用,可减轻移植物抗宿主病(GVHD)及其他移植相关并发症。

  一、细胞基本属性
细胞名称原代人脐带间充质干细胞MSC(免疫荧光鉴定报告)
种属来源
组织来源脐带
生长特性贴壁生长
形态特征梭形细胞
质量检测人脐带间充质干细胞纯度高于 90%,且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等
产品规格5x105cells/T25细胞培养瓶
培养基人脐带间充质干细胞专用培养基
培养条件气相:95%空气+5%二氧化碳;温度:37℃
流式鉴定结果1650349436191829.jpg
三系分化结果


传代特征可传5代左右;3代以内状态最佳
传代方法1:3至1:5,每周2- 3次
产品货期现货,1周左右
运输方式T25培养瓶/ 顺丰快递(包邮)
供应限制仅限于科学研究,绝不可作为动物或人类疾病的治疗产品使用
特别说明以下细胞培养冻存处理仅供参考,具体操作步骤以随货产品说明书为主
供应限制仅限于科学研究,绝不可作为动物或人类疾病的治疗产品使用
  二、细胞培养操作
到货方式活细胞(常温运输)
收货处理1.收到细胞后,请检查发货培养瓶的状况,是否有破损、漏液、浑浊等现象。如果有,请立即和我们联系;如果没有,请您用75%酒精消毒细胞瓶外壁,再将其置于37度培养箱静置4h。
2.静置后观察细胞状态,在显微镜下确认细胞生长状态时,最好在低倍镜(4或5X物镜)下进行,能准确判断细胞的传代密度。看细胞的形态请在10X和20X物镜下,同时给刚收到的细胞拍照,(10×,20×)各2-3张以及培养瓶外观照片一张留存,作为细胞需要售后时提供收到细胞时细胞状态的依据。拍照反馈给我们。
传代密度细胞密度达80%-90%,即可进行传代培养
传代方法1.弃去培养上清,用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2.加1 mL消化液(0.25%Trypsin-0.02% EDTA)于培养瓶中,使消化液浸润所有细胞,弃去消化液,将培养瓶置于37℃培养箱中消化1 min,然后在显微镜下观察细胞消化情况,若细胞大部分变圆并脱落,迅速拿回操作台,轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。
3.按6-8 mL/瓶补加培养基,轻轻打匀后装入无菌离心管中,1000 rpm离心4 min,弃去上清液,补加1-2 mL培养液后吹匀。
4.将细胞悬液按1:2比例分到新的含8 mL培养基的新皿中或者瓶中,置于培养箱中培养。
到货方式冻存细胞(干冰运输)
收货处理1.干冰运输的细胞到货,请检查干冰是否完全挥发,细胞是否解冻,若有上述现象发生请及时和我们联系。
2.为保证细胞的高存活率,收到产品后,请立即解冻复苏细胞,如若不能复苏请立即转入液氮冻存。
培养皿/瓶一管细胞建议接种到6cm培养皿或者T25瓶
复苏操作1.将含有1 mL细胞悬液的冻存管在 37℃水浴中迅速摇晃解冻,加4 mL培养基混合均匀。
2.在1000 rpm条件下离心3 min,弃去上清液,加1-2 mL培养基后吹匀。
3.然后将所有细胞悬液加入含适量培养基的培养瓶中培养过夜(或将细胞悬液加入6 cm皿中,加入约4 mL培养基,培养过夜)。
4.第二天换液并检查细胞密度。
注意事项1.运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞,请换用按照说明书细胞培养条件新配制的完全培养基来培养细胞。
2.因运输问题,部分细胞由于温度变化及剧烈碰撞死亡破碎形成碎片,是正常现象。请及时和我们联系,告知细胞的具体情况,以便我们的技术人员跟踪回访直至问题解决。
3. 申请售后时请提供细胞收货时及反馈售后当天细胞清晰照片及培养信息,建议客户在细胞传代培养后,定期拍照、记录细胞生长状态。
4.所有动物细胞均视为有潜在的生物危害性,必须在二级生物安全台内操作,并请注意防护,所有废液及接触过此细胞的器皿需要灭菌后方能丢弃。
5. 细胞在不同实验室培养由于所使用培养基及血清品牌、个人操作习惯、培养瓶品牌等诸多培养条件不尽相同,导致细胞培养形态、生长速度、贴壁情况均可能有所差异,对于此类细胞适应环境生长的行为,不予过度解释或免费售后。
  三、细胞冻存操作
冻存液配方无血清冻存液,液氮储存
冻存密度如果是有要求每管要冻多少细胞,那就用1ml完培重悬后,取部分按平时方法计数,剩下的细胞按计数需要的细胞量冻存即可。
如果没要求,那就按平时,一个皿冻一管。
冻存方法待细胞生长状态良好时,可进行细胞冻存。下面 T25 瓶为例
1.收集细胞及细胞培养液,装入无菌离心管中,1000 rpm条件下离心4 min,弃去上清液,用PBS清洗一遍,弃尽PBS,加1 mL血清重悬细胞,进行细胞计数。
2.根据细胞数量加入无血清细胞冻存液,使细胞密度5x106~1x107/mL,轻轻混匀,每支冻存管冻存1mL细胞悬液,注意冻存管做好标识。
3.将冻存管放入-80℃冰箱,24 h后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。
注意事项冻存细胞转入液氮后及时复苏一管检查细胞冻存活性,若有异常,及时调整实验方案

原代人脐带间充质干细胞MSC细胞文献溯源

1994年始,迄今为止,关于Human Umbilical Cord mesenchymal Stem Cells间充质干细胞的文献有5969篇。

原代人脐带间充质干细胞MSC细胞文献溯源图1

原代人脐带间充质干细胞MSC细胞文献溯源图2

在pubmed数据库中用“Human Umbilical Cord mesenchymal Stem Cells”搜索该关键词,第一篇为2000年Erices A在“Br J Haematol. ”上发表的“Mesenchymal progenitor cells in human umbilical cord blood”。

原代人脐带间充质干细胞MSC细胞应用领域

研究人员开发了多种方法来从不同组织中分离MSCs,如骨髓、脂肪、脐带和胎盘。这些方法包括传统的贴壁筛选、流式细胞术和磁珠分选等。研究人员还研究了MSCs的生长特性和表面标志物,如CD90、CD73和CD105等,以进行准确的表型鉴定。

MSCs被认为具有多能性,可以分化为多种细胞类型,包括成骨细胞、成软骨细胞、脂肪细胞和肌细胞。研究人员通过体外实验研究了MSCs向不同细胞类型分化的机制和调控因素,如生长因子、细胞因子和机械力等。此外,研究人员还研究了MSCs在体内分化的潜力,包括在骨骼、软骨和肌肉组织中的作用。

MSCs被用于组织工程和再生医学,因为它们能够促进组织修复和再生。研究人员利用MSCs构建了骨骼、软骨、肌肉和血管等组织工程产品,并研究了它们在体内外的生长和功能。此外,研究人员还探索了MSCs与其他细胞类型(如内皮细胞、神经元和上皮细胞)的相互作用,以及它们在组织修复中的作用。

MSCs被发现具有免疫调节作用,能够抑制免疫细胞的活化和增殖。研究人员研究了MSCs如何影响免疫系统,包括对T细胞、B细胞和巨噬细胞等的影响。此外,研究人员还研究了MSCs在炎症和自身免疫性疾病中的潜在治疗作用,如关节炎、哮喘和多发性硬化症等。

研究人员评估了MSCs在临床试验中的安全性和有效性,特别是在治疗心脏病、骨关节炎、中风和其他疾病中的应用。研究人员研究了MSCs的给药途径、剂量和治疗周期,以及它们在患者体内的分布和代谢。此外,研究人员还探讨了MSCs治疗的长期效果和可能的副作用。

MSCs的功能可能会下降。研究人员研究了MSCs衰老的机制,包括端粒缩短、基因表达改变和细胞代谢变化等。此外,研究人员还探索了如何通过药物或其他方法来增强MSCs的再生能力,包括抗氧化剂、生长因子和基因治疗等。

研究人员研究了MSCs中关键基因和信号通路的调控,以及它们如何影响MSCs的生物学特性。这些研究有助于理解MSCs在组织修复、免疫调节和衰老过程中的作用,并为MSCs的临床应用提供了新的治疗策略。

MSCs与肿瘤微环境之间的关系是研究的热点,研究人员探讨了MSCs在肿瘤发生、发展和治疗中的作用。一些研究表明,MSCs可能促进肿瘤的侵袭和转移,而另一些研究则表明,MSCs可能通过免疫调节作用抑制肿瘤生长。这些研究为肿瘤的诊断和治疗提供了新的思路。

原代人脐带间充质干细胞MSC胞标志物

间充质干细胞(MSC)的标志物包括CD105、CD73、CD90、CD133、CD44、CD10、Stro-1、BMP-2、VEGF和PDGFA等。这些标志物对于识别和研究MSC至关重要。

原代细胞培养常见问题

如何判断原代细胞衰老了

1.形态学的观察,细胞突起变大、或细胞扁平;2.β半乳糖苷染色判断细胞是否衰老;3.增殖速率明显下降;4.对相关的标志物进行检测。

如何确保分离的原代细胞的活性

1.组织离体时间不能太久;2.低温冰上分离,但也不能直接从-80℃冰箱上取出一块冰;3.无菌操作体系;4.消化酶的浓度和消化时间的把控。

原代细胞可以无限的增殖

与细胞系不同,原代细胞具有有限的扩增能力。建议尽早使用原代细胞进行实验以防止遗传漂移。此外,如果你正在使用一个增值困难的细胞类型,你应该密切监测细胞形态,因为少量混杂的细胞(如成纤维细胞)可能随着时间的推移,大量生长从而成为主要细胞。

如何让原代细胞一直保持增殖能力

原代细胞传代有限,可以通过构建永生化细胞株使其获得无限增殖的能力,即转变为永生化细胞系。

原代细胞一般第几代做实验比较好

5代以内,3代最好。有些细胞比如特殊,如神经元、巨噬为终末分化细胞,增殖能力很弱,建议客户收到细胞请镜下观察细胞生长状态后直接用于后续实验,不建议传代进行扩增培养和冻存。

原代细胞可以冻存吗?冻存复苏后活率差的原因是什么?

这取决于细胞的类型。一些细胞类型像神经细胞,神经胶质细胞和一些生长缓慢的上皮细胞,不推荐扩增培养和再次冻存。其它的细胞类型像成纤维细胞、星形细胞、肾系膜细胞、星形胶质细胞等等,可以扩增培养和再次冻存。然而,需要注意的是再次冻存的过程可能导致细胞生长性能的改变。冻存后复苏活率低需要考虑冻存前细胞活性,细胞量以及冻存体系,冻存体系是指用的含血清的冻存液,还是一步冻存液,不同冻存方法对应的操作方法不同需要注意。

通常我们不推荐重新冻存原代细胞,因为这可以促进细胞衰老和/或导致功能变化。原代细胞非常敏感,重新冻结可能导致细胞死亡或损伤。

贴壁的原代细胞很难消化是怎么回事

细胞初代培养时在细胞皿上培养的时间过长,解决方法可以将酶的浓度降低,37℃培养箱中延长消化时间,或者分步消化。

原代上皮细胞传代之后形态发生变化

上皮细胞,传代容易变形,上皮细胞传代后,不容易再次贴壁,这个时候可以使用代膜的培养瓶或者瓶子包被一下(基质胶,鼠尾胶原,多聚赖氨酸等)都可以,上皮细胞,传代非常有限, 且生长比较慢,一般建议尽快实验,不适合长时间去大量扩增培养。

因原代细胞体外传代有限,传代次数皆为大部分人使用后的平均数据,受操作手法,培养环境,培养条件等因素综合影响,建议收到后,尽快完成实验,不建议反复冻存一直传代扩增。

提取原代细胞经常发生污染可以怎样改善

首先要确保细胞分离实验室是否存在细菌污染,如果存在问题,需要将实验室进行消毒,培养箱灭菌,检查试剂耗材是否可用,第二个就是注意无菌操作,保证试剂、剪刀镊子等无菌,第三是可以在培养液中加抗生素,双抗、两性霉素等。

原代细胞售后规定

1.细胞运输途中遭遇的各种问题,细胞丢失、瓶身破损、培养液严重漏液,细胞未开封,如出现污染状况等,重发

2.客户操作造成细胞污染,细胞状态不好,非我司推荐细胞培养体系,未提供真实清晰的培养前3天的细胞状态照片,不重发

3.原代细胞不建议客户自行冻存,收货后及时传代并安排实验,超出代数的细胞可能出现突变、状态变差等现象导致细胞无法进一步传代或者进行实验,对于自行冻存的细胞一律不予免费售后

细胞百科知识

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