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ATCC细胞培养
货号：IMP-H166
规格：5x105cells/T25或1mL冻存管
形态：长梭形不规则细胞，贴壁培养
培养基：人软骨细胞专业培养基
培养环境：气相：95%空气+5%二氧化碳;温度：37℃
人软骨细胞传代时形态发生变化，这是正常现象
价格：¥8540
产品规格：500ml
¥1980
产品规格：100mL
¥500
产品规格：100mL
¥98
产品规格：100mL
¥68
人软骨细胞采用胶原酶-中性蛋白酶联合消化制备而来，人软骨细胞分离自软骨组织；软骨组织由软骨细胞、基质及纤维构成。软骨组织再生能力强，这些增生的幼稚细胞形似纤维母细胞，以后逐渐变为软骨母细胞，并形成软骨基质，细胞被埋在软骨陷窝内而变为静止的软骨细胞。根据软骨组织内所含纤维成分的不同，可将软骨分为透明软骨、弹性软骨和纤维软骨三种，其中以透明软骨的分布较广，结构也较典型。软骨细胞（chondrocyte）位于软骨陷窝内。幼稚的软骨细胞位于软骨组织的表层，单个分布，体积较小，呈椭圆形，长轴与软骨表面平行，越向深层的软骨细胞体积之间增大呈圆形，细胞核圆形或卵圆形，染色浅，细胞质弱嗜碱性，常见数量不一的脂滴。成熟的软骨细胞多2-8个成群分布于软骨陷窝内，这些软骨细胞由同一个母细胞分裂增殖而成，称为同源细胞群。
电镜下，软骨细胞有突起和皱褶，细胞质内有大量的粗面内质网和发达的高尔基复合体及少量的线粒体。在组织切片中，软骨细胞收缩为不规则形，在软骨囊和细胞之间出现较大的腔隙。体外培养的软骨细胞对于研究其生理功能、药物作用以及各种致病因素作用下的病理生理改变具重要意义。
| 一、细胞基本属性 | ||||
| 细胞名称 | 原代人软骨细胞（免疫荧光鉴定报告） | |||
| 种属来源 | 人 | |||
| 组织来源 | 关节 | |||
| 生长特性 | 贴壁生长 | |||
| 形态特征 | 长梭形细胞，不规则细胞 | |||
| 质量检测 | Ⅱ型胶原(Collagen Ⅱ)免疫荧光染色为阳性，纯度高于 90%，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等 | |||
| 产品规格 | 5x105cells/T25细胞培养瓶 | |||
| 培养基 | 人软骨细胞专业培养基 | |||
| 培养条件 | 气相：95%空气+5%二氧化碳；温度：37℃ | |||
| 换液频率 | 每2-3天换液一次 | |||
| 消化液 | 0.25%胰蛋白酶 | |||
| 运输方式 | T25培养瓶/顺丰快递（包邮） | |||
人软骨细胞培养常见问题 | ||||
人软骨细胞传代后变形，怎么办?软骨细胞传代后变形，可能是大多数老师在培养过程中都会遇到的问题。不过，传代时形态发生变化，这是正常现象。下面详解该细胞形态的变化过程：
第1代细胞形态图 第1代人软骨细胞，细胞形态呈梭形、多角形。(图片来源于客户，仅供参考) 第2代的细胞形态 传了1代后，细胞形态开始发生改变，细胞伸出丝状伪足，形态似成纤维细胞(图片来源于客户，仅供参考) 从第1代到第2代，细胞就发生了形态上的改变。那么，继续传代下去，细胞形态是否会继续发生改变呢 答案是肯定的。第3代的软骨细胞形态成纤维化会更为明显，细胞形态出现长梭形，并且生长速度开始下降。4代后较为明显，到第6代细胞形态几乎全部变为长梭形，似成纤维细胞样。所以，建议最好选择2代或3代的软骨细胞进行实验。 既然人软骨细胞传代时，形态会发生变化，那究竟是什么原因造成的呢? 在体外培养人软骨细胞时，软骨细胞呈贴壁生长，原代细胞大多呈椭圆形和多角形。随着传代次数增加，细胞逐渐变成长梭形，向纤维样细胞转化。同时，该细胞的功能也会发生变化：软骨标志性蛋白Ⅱ胶原合成分泌减少，而Ⅰ、Ⅲ型胶原合成分泌增多。 Ⅱ胶原的合成和分泌，是软骨细胞维持其分化表型的特征性指标，其在透明软骨中占胶原的85%~90%，提供了软骨特有的张力和硬度。 其次，软骨中的其他分子与胶原蛋白结合，会形成网状结构，使软骨具有一定的弹性，同时对于维持软骨形状，承载外来负荷起着非常重要的作用。所以，随着传代次数的增加，维持细胞形态的物质会逐渐减少，细胞的形态就会发生改变。 这种形态和功能的变化称之为反分化现象，也是单层传代细胞的普遍现象。 人软骨细胞培养技巧 a. 低密度培养的软骨细胞易发生去分化现象，一般最适接种密度为2~10×104/cm2; b. 软骨细胞代谢较为缓慢，换液频度的增加无益于细胞的增殖，反而可能破坏由细胞分泌而形成的群体化学环境。 | ||||
| 二、细胞培养操作 | ||||
| 到货方式 | 活细胞（常温运输） | |||
| 收货处理 | 1.收到细胞后，请检查发货培养瓶的状况，是否有破损、漏液、浑浊等现象。如果有，请立即和我们联系；如果没有，请您用75%酒精消毒细胞瓶外壁，再将其置于37度培养箱静置4h。 2.静置后观察细胞状态，在显微镜下确认细胞生长状态时，最好在低倍镜（4或5X物镜）下进行，能准确判断细胞的传代密度。看细胞的形态请在10X和20X物镜下，同时给刚收到的细胞拍照，（10×，20×）各2-3张以及培养瓶外观照片一张留存，作为细胞需要售后时提供收到细胞时细胞状态的依据。拍照反馈给我们。 | |||
| 传代密度 | 细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养 | |||
| 传代方法 | 1.弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。 2.加1 mL消化液（0.25%Trypsin-0.02% EDTA）于培养瓶中，使消化液浸润所有细胞，弃去消化液，将培养瓶置于37℃培养箱中消化1 min，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。 3.按6-8 mL/瓶补加培养基，轻轻打匀后装入无菌离心管中，1000 rpm离心4 min，弃去上清液，补加1-2 mL培养液后吹匀。 4.将细胞悬液按1:2比例分到新的含8 mL培养基的新皿中或者瓶中，置于培养箱中培养。 | |||
| 到货方式 | 冻存细胞（干冰运输） | |||
| 收货处理 | 1.干冰运输的细胞到货，请检查干冰是否完全挥发，细胞是否解冻，若有上述现象发生请及时和我们联系。 2.为保证细胞的高存活率，收到产品后，请立即解冻复苏细胞，如若不能复苏请立即转入液氮冻存。 | |||
| 培养皿/瓶 | 一管细胞建议接种到6cm培养皿或者T25瓶 | |||
| 复苏操作 | 1.将含有1 mL细胞悬液的冻存管在 37℃水浴中迅速摇晃解冻，加4 mL培养基混合均匀。 2.在1000 rpm条件下离心3 min，弃去上清液，加1-2 mL培养基后吹匀。 3.然后将所有细胞悬液加入含适量培养基的培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入6 cm皿中，加入约4 mL培养基，培养过夜）。 4.第二天换液并检查细胞密度。 | |||
| 注意事项 | 1.运输用的培养基（灌液培养基）不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的完全培养基来培养细胞。 2.因运输问题，部分细胞由于温度变化及剧烈碰撞死亡破碎形成碎片，是正常现象。请及时和我们联系，告知细胞的具体情况，以便我们的技术人员跟踪回访直至问题解决。 3. 申请售后时请提供细胞收货时及反馈售后当天细胞清晰照片及培养信息，建议客户在细胞传代培养后，定期拍照、记录细胞生长状态。 4.所有动物细胞均视为有潜在的生物危害性，必须在二级生物安全台内操作，并请注意防护，所有废液及接触过此细胞的器皿需要灭菌后方能丢弃。 5. 细胞在不同实验室培养由于所使用培养基及血清品牌、个人操作习惯、培养瓶品牌等诸多培养条件不尽相同，导致细胞培养形态、生长速度、贴壁情况均可能有所差异，对于此类细胞适应环境生长的行为，不予过度解释或免费售后。 | |||
| 三、细胞冻存操作 | ||||
| 冻存液配方 | 无血清冻存液，液氮储存 | |||
| 冻存密度 | 如果是有要求每管要冻多少细胞，那就用1ml完培重悬后，取部分按平时方法计数，剩下的细胞按计数需要的细胞量冻存即可。 如果没要求，那就按平时，一个皿冻一管。 | |||
| 冻存方法 | 待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。下面 T25 瓶为例 1.收集细胞及细胞培养液，装入无菌离心管中，1000 rpm条件下离心4 min，弃去上清液，用PBS清洗一遍，弃尽PBS，加1 mL血清重悬细胞，进行细胞计数。 2.根据细胞数量加入无血清细胞冻存液，使细胞密度5x106~1x107/mL，轻轻混匀，每支冻存管冻存1mL细胞悬液，注意冻存管做好标识。 3.将冻存管放入-80℃冰箱，24 h后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。 | |||
| 注意事项 | 冻存细胞转入液氮后及时复苏一管检查细胞冻存活性，若有异常，及时调整实验方案 | |||
1972年始，迄今为止，关于人软骨细胞(HC细胞)的文献已有2005篇。
在pubmed数据库中用“human chondrocyte cell line”搜索该关键词，第一篇为1972年M T Corvol在Endocrinology.发表的“A pituitary growth-promoting factor for articular chondrocytes in monolayer culture”。
人软骨细胞(HC)来源于正常的人关节软骨，它们产生并维持软骨的细胞外基质，包括II型胶原蛋白。在研究中，这些细胞是细胞重编程和分化的金标准对照。
针对HC的表型特征描述和观察其分化为破骨细胞。
研究使用HC来描述细胞受体的分子生物学、信号级联、细胞因子激活和基因调控。
HC涉及在炎症性疾病(如类风湿性关节炎、骨关节炎和莱姆病相关的关节炎)中看到的凋亡、细胞毒性和软骨降解。
通过检查剪切应力和机械转导途径的效果，一些研究人员希望利用HC开发出治疗侵蚀性关节病变的方法。
一些实验室利用HC研究单克隆抗体治疗或针对关节炎治疗的侵蚀性基质金属蛋白酶抑制剂的抑制。
因HC在潜在的临床应用中受到关注，因为HC能粘附在医疗植入物上并渗透到用于软骨再生的支架中。
Collagen Type II和Aggrecan，以及Sox9。还有CD73、CD105、CD146、Collagen Type I、Osteopontin、MMP-13和C3等。这些标志物对于识别和研究软骨细胞非常重要。
如何判断原代细胞衰老了
1.形态学的观察，细胞突起变大、或细胞扁平;2.β半乳糖苷染色判断细胞是否衰老;3.增殖速率明显下降;4.对相关的标志物进行检测。
如何确保分离的原代细胞的活性
1.组织离体时间不能太久;2.低温冰上分离，但也不能直接从-80℃冰箱上取出一块冰;3.无菌操作体系;4.消化酶的浓度和消化时间的把控。
原代细胞可以无限的增殖
与细胞系不同，原代细胞具有有限的扩增能力。建议尽早使用原代细胞进行实验以防止遗传漂移。此外，如果你正在使用一个增值困难的细胞类型，你应该密切监测细胞形态，因为少量混杂的细胞(如成纤维细胞)可能随着时间的推移，大量生长从而成为主要细胞。
如何让原代细胞一直保持增殖能力
原代细胞传代有限，可以通过构建永生化细胞株使其获得无限增殖的能力，即转变为永生化细胞系。
原代细胞一般第几代做实验比较好
5代以内，3代最好。有些细胞比如特殊，如神经元、巨噬为终末分化细胞，增殖能力很弱，建议客户收到细胞请镜下观察细胞生长状态后直接用于后续实验，不建议传代进行扩增培养和冻存。
原代细胞可以冻存吗？冻存复苏后活率差的原因是什么?
这取决于细胞的类型。一些细胞类型像神经细胞，神经胶质细胞和一些生长缓慢的上皮细胞，不推荐扩增培养和再次冻存。其它的细胞类型像成纤维细胞、星形细胞、肾系膜细胞、星形胶质细胞等等，可以扩增培养和再次冻存。然而，需要注意的是再次冻存的过程可能导致细胞生长性能的改变。冻存后复苏活率低需要考虑冻存前细胞活性，细胞量以及冻存体系，冻存体系是指用的含血清的冻存液，还是一步冻存液，不同冻存方法对应的操作方法不同需要注意。
通常我们不推荐重新冻存原代细胞，因为这可以促进细胞衰老和/或导致功能变化。原代细胞非常敏感，重新冻结可能导致细胞死亡或损伤。
贴壁的原代细胞很难消化是怎么回事
细胞初代培养时在细胞皿上培养的时间过长，解决方法可以将酶的浓度降低，37℃培养箱中延长消化时间，或者分步消化。
原代上皮细胞传代之后形态发生变化
上皮细胞，传代容易变形，上皮细胞传代后，不容易再次贴壁，这个时候可以使用代膜的培养瓶或者瓶子包被一下(基质胶，鼠尾胶原，多聚赖氨酸等)都可以，上皮细胞，传代非常有限， 且生长比较慢，一般建议尽快实验，不适合长时间去大量扩增培养。
因原代细胞体外传代有限，传代次数皆为大部分人使用后的平均数据，受操作手法，培养环境，培养条件等因素综合影响，建议收到后，尽快完成实验，不建议反复冻存一直传代扩增。
提取原代细胞经常发生污染可以怎样改善
首先要确保细胞分离实验室是否存在细菌污染，如果存在问题，需要将实验室进行消毒，培养箱灭菌，检查试剂耗材是否可用，第二个就是注意无菌操作，保证试剂、剪刀镊子等无菌，第三是可以在培养液中加抗生素，双抗、两性霉素等。
1.细胞运输途中遭遇的各种问题，细胞丢失、瓶身破损、培养液严重漏液，细胞未开封，如出现污染状况等，重发
2.客户操作造成细胞污染，细胞状态不好，非我司推荐细胞培养体系，未提供真实清晰的培养前3天的细胞状态照片，不重发
3.原代细胞不建议客户自行冻存，收货后及时传代并安排实验，超出代数的细胞可能出现突变、状态变差等现象导致细胞无法进一步传代或者进行实验，对于自行冻存的细胞一律不予免费售后
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