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原代细胞培养常见问题

如何判断原代细胞衰老了

1.形态学的观察，细胞突起变大、或细胞扁平;2.β半乳糖苷染色判断细胞是否衰老;3.增殖速率明显下降;4.对相关的标志物进行检测。

如何确保分离的原代细胞的活性

1.组织离体时间不能太久;2.低温冰上分离，但也不能直接从-80℃冰箱上取出一块冰;3.无菌操作体系;4.消化酶的浓度和消化时间的把控。

原代细胞可以无限的增殖

与细胞系不同，原代细胞具有有限的扩增能力。建议尽早使用原代细胞进行实验以防止遗传漂移。此外，如果你正在使用一个增值困难的细胞类型，你应该密切监测细胞形态，因为少量混杂的细胞(如成纤维细胞)可能随着时间的推移，大量生长从而成为主要细胞。

如何让原代细胞一直保持增殖能力

原代细胞传代有限，可以通过构建永生化细胞株使其获得无限增殖的能力，即转变为永生化细胞系。

原代细胞一般第几代做实验比较好

5代以内，3代最好。有些细胞比如特殊，如神经元、巨噬为终末分化细胞，增殖能力很弱，建议客户收到细胞请镜下观察细胞生长状态后直接用于后续实验，不建议传代进行扩增培养和冻存。

原代细胞可以冻存吗？冻存复苏后活率差的原因是什么?

这取决于细胞的类型。一些细胞类型像神经细胞，神经胶质细胞和一些生长缓慢的上皮细胞，不推荐扩增培养和再次冻存。其它的细胞类型像成纤维细胞、星形细胞、肾系膜细胞、星形胶质细胞等等，可以扩增培养和再次冻存。然而，需要注意的是再次冻存的过程可能导致细胞生长性能的改变。冻存后复苏活率低需要考虑冻存前细胞活性，细胞量以及冻存体系，冻存体系是指用的含血清的冻存液，还是一步冻存液，不同冻存方法对应的操作方法不同需要注意。

通常我们不推荐重新冻存原代细胞，因为这可以促进细胞衰老和/或导致功能变化。原代细胞非常敏感，重新冻结可能导致细胞死亡或损伤。

贴壁的原代细胞很难消化是怎么回事

细胞初代培养时在细胞皿上培养的时间过长，解决方法可以将酶的浓度降低，37℃培养箱中延长消化时间，或者分步消化。

原代上皮细胞传代之后形态发生变化

上皮细胞，传代容易变形，上皮细胞传代后，不容易再次贴壁，这个时候可以使用代膜的培养瓶或者瓶子包被一下(基质胶，鼠尾胶原，多聚赖氨酸等)都可以，上皮细胞，传代非常有限， 且生长比较慢，一般建议尽快实验，不适合长时间去大量扩增培养。

因原代细胞体外传代有限，传代次数皆为大部分人使用后的平均数据，受操作手法，培养环境，培养条件等因素综合影响，建议收到后，尽快完成实验，不建议反复冻存一直传代扩增。

提取原代细胞经常发生污染可以怎样改善

首先要确保细胞分离实验室是否存在细菌污染，如果存在问题，需要将实验室进行消毒，培养箱灭菌，检查试剂耗材是否可用，第二个就是注意无菌操作，保证试剂、剪刀镊子等无菌，第三是可以在培养液中加抗生素，双抗、两性霉素等。

原代细胞售后规定

1.细胞运输途中遭遇的各种问题，细胞丢失、瓶身破损、培养液严重漏液，细胞未开封，如出现污染状况等，重发

2.客户操作造成细胞污染，细胞状态不好，非我司推荐细胞培养体系，未提供真实清晰的培养前3天的细胞状态照片，不重发

3.原代细胞不建议客户自行冻存，收货后及时传代并安排实验，超出代数的细胞可能出现突变、状态变差等现象导致细胞无法进一步传代或者进行实验，对于自行冻存的细胞一律不予免费售后

细胞百科知识

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