hPSC来源运动神经元细胞iMN(iPSC)

背景介绍

hPSC-运动神经元是从人类多能干细胞(hPSC)分化得来，该细胞是分化早期 的运动神经元，表达 ISL1 、PRPH 等标志物，具有继续向成熟运动神经元(mMN)分化的能 力。分化获得的成熟运动神经元(mMN)能表达运动神经元的特异性 Marker(如 CHAT, MAP2 等)。

产品信息

培养操作

1)复苏细胞：

将含有 1 mL 细胞悬液的冻存管在 37℃水浴中迅速摇晃解冻，加 4 mL MN 维持培养基(含 10 μM Y-27632)混合均匀。在 1000 rpm 条件下离心 3 min ，弃去上清液，加 1-2mL MN 维持培养基(含 10μM Y-27632)后吹匀。然后将所有细胞悬液加入含适量 MN 维持培养基(含 10 μM Y-27632)的基质胶或 laminin 包被的六孔板(1 孔)或 35mm 皿中培 养过夜。24h 后，换成不含Y-27632 的 MN 维持培养基(MN 贴壁不牢固，换液动作需轻缓)， 视培养基颜色或隔 2 天换液。

2)细胞铺板(当有实验需求时可按实验所需密度进行铺板)：

a、弃去培养基，加入 1-2 mL Accutase(含 10 μM Y-27632)，置于 37℃培养箱消化 3-5min。

b 、3-5 min 后每孔加入等量 MN 维持培养基(含 10 μM Y-27632)，轻轻吹打细胞，使 细胞解离成单细胞。

c 、将细胞悬液收集到 15 mL 离心管中，室温下 300 g 离心 5 min。

d 、仔细抽吸上清液，不干扰细胞，用 1mL 恢复室温的 MN 维持培养基重悬细胞(含 10 μM Y-27632)，轻轻地上下移液以确保细胞溶液均匀。

e 、使用MN 维持培养基(含 10μM Y-27632)稀释细胞，将细胞以实验所需密度接种到 基质胶或 laminin 包被的六孔板(1 孔)或 35mm 皿中培养过夜。24h 后，换成不含Y-27632 的 MN 维持培养基(MN 贴壁不牢固，换液动作需轻缓)，视培养基颜色或隔 2 天换液。

培养注意事项

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液、浑浊等现象，若有上述现象发 生请及时和我们联系。

2. 仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息，如细胞形态、所用培养基、所需细胞因子等， 确保细胞培养条件一致，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题，责任由客户自行承担。

3. 用 75%酒精擦拭细胞瓶表面，显微镜下观察细胞状态。因运输问题，部分细胞由于温度变 化及剧烈碰撞死亡破碎形成碎片，是正常现象。观察好细胞状态后，75%酒精消毒瓶壁将 T25 瓶置于 37℃培养箱放置 2-4h。

4. 客户可购买逸漠生物 MN 维持培养基(含 MN 维持基础培养基，货号 IMI-MN01M 1 ;MN 维持培养基补充剂，货号 IMI-MN01MA)。

5. 建议客户收到细胞后前 3 天各拍几张细胞照片，记录细胞状态，便于和我司技术部沟通交 流。由于运输的原因，个别敏感细胞会出现不稳定的情况，请及时和我们联系，告知细胞的具 体情况，以便我们的技术人员跟踪回访直至问题解决。

6.该细胞仅供科研使用。

备注：运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条 件新配制的完全培养基来培养细胞。