视网膜色素上皮细胞(RPE)维持培养基

产品描述

视网膜色素上皮细胞(Retinal Pigment Epithelium，RPE)维持培养基是一种适用于人多能干细胞来源视网膜色素上皮细胞，无血清，无动物源成分的完全培养基，

RPE 在本培养基中可以持续存活传3代而维持特性不变，适用于体外研究。

产品信息

表1. RPE维持培养基组成信息

注：括号内容如25×为母液浓度，使用时终浓度需为1×。例如RPE维持培养基补充剂(25×)需添加进RPE维持基础培养基使其稀释25倍，使得补充剂终浓度为1×，配成RPE维持培养基。

实验试剂与材料

表2. 推荐试剂&材料

实验内容与方法(以6孔板1个孔为例)

一、完全培养基配制

(1)在 4℃解冻RPE维持培养基补充剂(25×)不要在 37℃条件下解冻。

(2)在生物安全柜中，按照实验用量，例如若用量为50 mL，配制方法为48 mL RPE维持基础培养基+2 mL RPE维持培养基补充剂(25×)配成RPE维持培养基。

(3)培养基建议现配现用，置于 4℃储存，2 周内使用。

注：补充剂可根据使用量进行分装以避免反复冻融。

二、RPE复苏

(1)将含有1 mL细胞悬液的冻存管在 37℃水浴中迅速摇晃解冻，加5 mL RPE维持培养基(含10μM Y-27632)混合均匀。

(2)在1000 rpm条件下离心3 min，弃去上清液，加2 mL RPE维持培养基(含10μM Y-27632)后吹匀。加入基质胶包被的六孔板(1孔)或35mm皿中培养过夜。

(3)24h后，换成不含Y-27632的RPE维持培养基，每隔2-3天换液。

三、细胞传代

(1)弃去培养基，每孔加入1mL TrypLE，置于37℃培养箱消化10-15min。

(2)10-15 min后每孔加入等量 RPE维持培养基，轻轻吹打细胞，使细胞解离成单细胞。

(3)将细胞悬液收集到15 mL离心管中，室温下300 g离心3 min。

(4)仔细抽吸上清液，不干扰细胞，用1mL恢复室温的RPE维持培养基重悬细胞，轻轻地上下移液以确保细胞溶液均匀。

(5)使用RPE维持培养基稀释细胞，以1:4-1:5比例接种到基质胶包被的六孔板或35mm皿中培养。每隔2-3天换液，每3周传一次代。