hPSC-肝实质细胞维持培养基

产品描述

hPSC-肝实质细胞维持培养基是一种适用于hPSC来源肝实质细胞，无血清，成分明确的完全培养基，肝实质细胞在本培养基中可以持续存活并保持标志物ALB或CYP3A4的表达，适用于体外研究。

产品信息

表1. 肝实质细胞维持培养基组成信息

注：括号内容如50×为母液浓度，使用时终浓度需为1×。例如肝实质细胞维持培养基补充剂(50×)需添加进肝实质细胞维持基础培养基使其稀释50倍，使得补充剂终浓度为1×，配成肝实质细胞维持培养基。

实验试剂与材料

表2. 推荐试剂&材料

实验内容与方法(以6孔板1个孔为例)

一、完全培养基配制

(1) 在 4℃解冻肝实质细胞维持培养基补充剂(50×)，不要在 37℃条件下解冻。

(2) 在生物安全柜中，按照实验用量，例如若用量为50 mL，配制方法为49 mL 肝实质细胞维持基础培养基+1 mL 肝实质细胞维持培养基补充剂(50×)配成肝实质细胞维持培养基。

(3) 培养基建议现配现用，置于 4℃储存，2 周内使用。

注：补充剂可根据使用量进行分装以避免反复冻融。

二、CM复苏

(1) 将含有1 mL细胞悬液的冻存管在 37℃水浴中迅速摇晃解冻，加4 mL 肝实质细胞维持培养基(含10μM IMC-014-Y)混合均匀。在300g条件下离心3 min，弃去上清液，加1-2 mL 肝实质细胞维持培养基(含10μM IMC-014-Y)后吹匀。

(2) 将所有细胞悬液加入含适量肝实质细胞维持培养基(含10μM IMC-014-Y)的基质胶或laminin 521包被的六孔板(1孔)中培养过夜。

(3) 24h后，换成不含IMC-014-Y的肝实质细胞维持培养基，视培养基颜色或隔2天换液。

三、细胞铺板(当有实验需求时可按所需密度重新接种)

(1) 弃去培养基，若基质胶包被，则每孔加入1mL 0.25%胰蛋白酶消化液，置于37℃培养箱消化5-10 min。

(2) 5-10 min后每孔加入等量肝实质细胞维持培养基中止消化，轻轻吹打细胞，使细胞解离成单细胞。

(3) 将细胞悬液收集到15 mL离心管中，室温下300 g离心3 min。

(4) 仔细抽吸上清液，不干扰细胞，用1mL恢复室温的肝实质细胞维持培养基重悬细胞，轻轻地上下移液以确保细胞溶液均匀。

(5) 使用肝实质细胞维持培养基稀释细胞，将细胞按实验所需密度接种到基质胶或laminin521包被的六孔板或35mm皿中培养。视培养基颜色或每隔2-3天换液。