多巴胺神经元祖细胞(mDAP)维持培养基

产品描述

中脑多巴胺神经元祖细胞(mDAP)维持培养基是一种适用于人类中脑多巴胺神经元祖细胞(Human midbrain dopaminergic neurons progenitor, hmDAP)，无血清完全培养基，hmDAP 在本培养基中可以传5-6代，具有分化为成熟多巴胺神经元的能力，适用于体外研究。

产品信息

表1. mDA维持培养基组成信息

注：括号内容如50×为母液浓度，使用时终浓度需为1×。例如mDAP维持培养基补充剂A(50×)、mDAP维持培养基补充剂B(125×)需添加进mDAP维持基础培养基使其分别稀释50、125倍，使得补充剂终浓度为1×，配成mDAP维持培养基。

实验试剂与材料

表2. 推荐试剂&材料

实验内容与方法(以6孔板1个孔为例)

一、完全培养基配制

(1) 在 4℃解冻mDAP维持培养基补充剂A(50×)、mDAP维持培养基补充剂B(125×)，不要在 37℃条件下解冻。

(2) 在生物安全柜中，按照实验用量，例如若用量为50 mL，配制方法为48.6 mL mDAP维持基础培养基+1mL mDAP维持培养基补充剂(50×)+400μL mDAP维持培养基补充剂B(125×)配成mDAP维持培养基。

(3) 培养基建议现配现用，置于 4℃储存，2 周内使用。

注：补充剂可根据使用量进行分装以避免反复冻融。

二、mDAP复苏

(1) 低生长因子基质胶(GFR Matrigel )4℃下解冻，按1:100的稀释比使用DMEM/F12进行稀释，一般六孔板每孔加2 mL稀释后的GFR Matrigel ，其他板按底面积换算，可在4℃保存，尽量于1周内使用,使用前需置于室温1h或37℃培养箱孵育30分钟以上，以恢复至室温。

(1) 将含有1 mL细胞悬液的冻存管在 37℃水浴中迅速摇晃解冻，加4 mL mDAP维持培养基混合均匀。在300g条件下离心3 min，弃去上清液，加1-2 mL mDAP维持培养基后吹匀。

(2) 将所有细胞悬液接种于GFR Matrigel 包被的的六孔板(1孔)中培养。

(3) 视培养基颜色或隔2天换液，若期间培养基变黄，及时换液。

三、细胞传代

(1) 当细胞密度达到90%-95%时，进行传代。弃去培养基，加入1-2 mL Accutase(含10μM Y-27632)，置于37℃培养箱消化3-5min。

(2) 3-5 min后每孔加入等量 mDAP维持培养基，轻轻吹打细胞，使其解离成单细胞。

(3) 将细胞悬液收集到15 mL离心管中，室温下300 g离心3 min。

(4) 仔细抽吸上清液，不干扰细胞，用1mL恢复室温的mDAP维持培养基重悬细胞，轻轻地上下移液以确保细胞溶液均匀。

(5) 使用mDAP维持培养基稀释细胞，将细胞按1:3传代比例接种到低生长因子基质胶(Corning, 356231)包被的培养板中培养。视培养基颜色或隔2天换液。

注：mDAP可传5-6代，传代次数越多，细胞越倾向于向多巴胺神经元自发分化。