多巴胺神经元(mDA)维持培养基

产品描述

中脑多巴胺神经元(mDA)维持培养基是一种适用于人类中脑多巴胺神经元(Human midbrain dopaminergic neurons, hmDA)，无血清，无动物源成分的完全培养基，hmDA 在本培养基中可以持续存活并成熟为表达TH, DAT，GIRK2的成熟mDA，适用于体外研究。

产品信息

表1. mDA维持培养基组成信息

注：括号内容如50×为母液浓度，使用时终浓度需为1×。例如mDA维持培养基补充剂(50×)需添加进mDA维持基础培养基使其稀释50倍，使得补充剂终浓度为1×，配成mDA维持培养基。

实验试剂与材料

表2. 推荐试剂&材料

实验内容与方法(以6孔板1个孔为例)

一、完全培养基配制

(1) 在 4℃解冻mDA维持培养基补充剂(50×)，不要在 37℃条件下解冻。

(2) 在生物安全柜中，按照实验用量，例如若用量为50 mL，配制方法为49 mL mDA维持基础培养基+1mL mDA维持培养基补充剂(50×)配成mDA维持培养基。

(3) 分化培养基建议现配现用，置于 4℃储存，2 周内使用。

注：补充剂可根据使用量进行分装以避免反复冻融。

二、mDA复苏

(1) 神经元培养包被液在4℃下解冻，用DMEM/F12稀释至所需浓度，均匀混合，按2 U/cm2的包被密度铺板，备用。

(2) 将含有1 mL细胞悬液的冻存管在 37℃水浴中迅速摇晃解冻，加4 mL mDA维持培养基(含10μM IMC-014-Y)混合均匀。在300g条件下离心3 min，弃去上清液，加1-2 mL mDA维持培养基(含10μM IMC-014-Y)后吹匀。

(3) 将所有细胞悬液加入含适量mDA维持培养基(含10μM IMC-014-Y)的神经元培养包被液的六孔板(1孔)中培养过夜。

(4) 48h后，换成不含IMC-014-Y的mDA维持培养基，视培养基颜色或隔2天换液(若期间培养基变黄，及时换液)，。

三、细胞铺板

(1) 弃去培养基，加入1-2 mL Accutase(含10μM IMC-014-Y)，置于37℃培养箱消化5min。

(2) 5 min后每孔加入等量 mDA维持培养基(含10μM IMC-014-Y)，轻轻吹打细胞，使细胞解离成单细胞。

(3) 将细胞悬液收集到15 mL离心管中，室温下300 g离心3 min。

(4) 仔细抽吸上清液，不干扰细胞，用1mL恢复室温的mDA维持培养基重悬细胞(含10μM IMC-014-Y)，轻轻地上下移液以确保细胞溶液均匀。

(5) 使用mDA维持培养基(含10μM Y-27632)稀释细胞，将细胞以实验所需细胞量接种到神经元培养包被液(货号：IMI-MA01MB)包被的培养板中培养过夜。48h后，换成不含Y-27632的mDA维持培养基，视培养基颜色或隔2天换液。

注：mDA不能扩增，尽量减少接种。