运动神经元祖细胞维持培养基

产品描述

hPSC来源运动神经元祖细胞维持培养基是一种适用于人类运动神经元祖细胞(Human motor neuron progenitor, hMNP)，无血清，无动物源成分的完全培养基，hMNP 在本培养基中可以持续存活并至少在5代内维持Olig2的高表达，适用于体外研究。

产品信息

表1. MNP维持培养基组成信息

注：括号内容如200×为母液浓度，使用时终浓度需为1×。例如MNP维持培养基补充剂A(200×)以及补充剂B(50×)需添加进MNP维持基础培养基使其分别稀释200倍和50倍，使得补充剂终浓度为1×，配成MNP维持培养基。

实验试剂与材料

表2. 推荐试剂&材料

实验内容与方法(以6孔板1个孔为例)

一、完全培养基配制

(1)在 4℃解冻MNP维持培养基补充剂A(200×)、MNP维持培养基补充剂B(50×)，不要在 37℃条件下解冻。

(2)在生物安全柜中，按照实验用量，例如若用量为50 mL，配制方法为48.75 mL MNP维持基础培养基+0.25 mL MNP维持培养基补充剂A(200×)+1 mL MNP维持培养基补充剂B(50×)配成MNP维持培养基。

(3)培养基建议现配现用，置于 4℃储存，2 周内使用。

注：补充剂可根据使用量进行分装以避免反复冻融。

二、MN复苏

(1)将含有1 mL细胞悬液的冻存管在 37℃水浴中迅速摇晃解冻，加4 mL MNP维持培养基(含10μM IMC-014-Y)混合均匀。在300g条件下离心3 min，弃去上清液，加1-2 mL MNP维持培养基(含10μM IMC-014-Y)后吹匀。

(2)将所有细胞悬液加入含适量MNP维持培养基(含10μM IMC-014-Y)的基质胶或laminin 521包被的六孔板(1孔)中培养过夜。

(3)24h后，换成不含IMC-014-Y的MNP维持培养基，视培养基颜色或隔2天换液。

三、细胞传代(当有实验需求时可按培养器皿底面积1:1比例接种传代)

(1)弃去培养基，每孔加入1mL Accutase(含10μM IMC-014-Y)，置于37℃培养箱消化4-5min。

(2)4-5 min后每孔加入等量 MNP维持培养基(含10μM IMC-014-Y)，轻轻吹打细胞，使细胞解离成单细胞。

(3)将细胞悬液收集到15 mL离心管中，室温下300 g离心3 min。

(4)仔细抽吸上清液，不干扰细胞，用1mL恢复室温的MNP维持培养基重悬细胞(含10μM IMC-014-Y)，轻轻地上下移液以确保细胞溶液均匀。

(5)使用MNP维持培养基(含10μM IMC-014-Y)稀释细胞，以1:6比例(按底面积换算)接种到基质胶包被的六孔板或35mm皿中培养过夜。24h后，换成不含IMC-014-Y的MNP维持培养基，视培养基颜色或隔2天换液。