心肌细胞维持培养基

产品描述

心肌细胞(CM)维持培养基是一种适用于人类心肌细胞(Human cardiomyocyte, hCM)，无血清， 无动物源成分的完全培养基，hCM 在本培养基中可以持续存活并保持标志物 Cardiac Troponin T 的表 达以及维持其搏动功能，适用于体外研究。

产品信息

表 1. CM 维持培养基组成信息

注：括号内容如 25×为母液浓度，使用时终浓度需为 1 × 。例如 CM 维持培养基补充剂(25×) 需添加进 CM 维持基础培养基使其稀释 25 倍，使得补充剂终浓度为 1 × , 配成 CM 维持培养基。

实验试剂与材料

表 2. 推荐试剂&材料

实验内容与方法(以6 孔板 1 个孔为例)

一、完全培养基配制

(1) 在 4℃解冻 CM 维持培养基补充剂(25×) , 不要在 37℃条件下解冻。

(2) 在生物安全柜中，按照实验用量，例如若用量为 50 mL ，配制方法为 48mL CM 维持基础 培养基+2 mL CM 维持培养基补充剂(25×) 配成 CM 维持培养基。

(3) 培养基建议现配现用，置于 4℃储存，2 周内使用。

注：补充剂可根据使用量进行分装以避免反复冻融。

二、CM 复苏

(1) 将含有 1 mL 细胞悬液的冻存管在 37℃水浴中迅速摇晃解冻，加 4mL CM 维持培养基(含 10 μM IMC-014-Y)混合均匀。在 300g 条件下离心 3 min ，弃去上清液，加 1-2 mL CM 维持培养 基(含 10 μM IMC-014-Y)后吹匀。

(2) 将所有细胞悬液加入含适量 CM 维持培养基(含 10μM IMC-014-Y)的基质胶或 laminin 521 包被的六孔板(1 孔)中培养过夜。

(3) 24h 后，换成不含IMC-014-Y 的 CM 维持培养基，视培养基颜色或隔 2 天换液。

三、细胞传代(当有实验需求时可按培养器皿底面积 1:1 比例接种传代)

(1) 弃去培养基，若基质胶包被，则每孔加入 1mL 心肌细胞消化液(货号 IMI-M001X)， 置于 37℃培养箱消化 1-2 h。若 laminin 521 包被，则加入 0.25%胰蛋白酶消化液消化，5min。

(2) 消化结束后每孔加入等量 CM 维持培养基(含 10μM IMC-014-Y)，轻轻吹打细 胞，使细胞解离成单细胞。

(3) 将细胞悬液收集到 15 mL 离心管中，室温下 300 g 离心 3 min。

(4) 仔细抽吸上清液，不干扰细胞，用 1mL 恢复室温的 CM 维持培养基重悬细胞(含 10 μM IMC-014-Y)，轻轻地上下移液以确保细胞溶液均匀。

(5) 使用 CM 维持培养基(含 10 μM IMC-014-Y)稀释细胞，以 1:1 比例(按底面积 换算)接种到基质胶或laminin 521包被的六孔板或 35mm 皿中培养过夜。24h 后，换成不 含 IMC-014-Y 的 CM 维持培养基，视培养基颜色或隔 2 天换液。