胰腺祖细胞维持培养基

产品描述

胰腺祖细胞(pancreatic progenitor cells，PP)维持培养基是一种适用于多能干细胞来源胰腺祖细胞、原代胰腺祖细胞，无血清成分的完全培养基，胰腺祖细胞在本培养基中可以传至少5代而维持特性不变，适用于体外研究。

产品信息

表1. 胰腺祖细胞维持培养基组成信息

注：括号内容如25×为母液浓度，使用时终浓度需为1×。例如PP培养补充剂(25×)需添加进PP维持基础培养基使其稀释25倍，使得补充剂终浓度为1×，配成胰腺祖细胞维持培养基。

实验试剂与材料

表2. 推荐试剂&材料

实验内容与方法(以6孔板1个孔为例)

一、完全培养基配制

(1) 在 4℃解冻PP培养补充剂(25×)不要在 37℃条件下解冻。

(2) 在生物安全柜中，按照实验用量，例如若用量为50 mL，配制方法为48 mL PP维持基础培养基+2 mL PP培养补充剂(25×)配成胰腺祖细胞维持培养基。

(3) 培养基建议现配现用，置于 4℃储存，2 周内使用。

注：补充剂可根据使用量进行分装以避免反复冻融。

二、胰腺祖细胞复苏

(1) 将含有1 mL细胞悬液的冻存管在 37℃水浴中迅速摇晃解冻，加10 mL DMEM培养基(含10μM Y-27632)混合均匀。

(2) 300g离心3min，弃去上清，加1 mL胰腺祖细胞维持培养基(含10μM Y-27632)重悬，按3.2×105个细胞/cm2密度接种，培养24h。

(3) 24h后，换成不含Y-27632的胰腺祖细胞维持培养基进行维持培养，每天换液。

三、细胞传代

(1) PP生长4-7天后(此时密度应至少100%)，从培养物中抽吸培养基，在6孔板中每孔用2 mL 1×室温PBS(不含Ca2+/Mg2+)清洗培养物，吸去PBS。 每孔加入1mL的室温Tryple，将培养物置于37℃ 5%CO2细胞培养箱中孵育3-5 min。

(2) 3-5min后每孔加入1mL DMEM中止消化，轻轻吹打细胞，使细胞脱离孔底。

(3) 将细胞悬液收集到15 mL离心管中，室温下300 g离心3 min。

(4) 仔细抽吸上清液，不干扰细胞，加1 mL胰腺祖细胞维持培养基(含10μM Y-27632)重悬，按2.1×105个细胞/cm2进行接种，培养24h。

(5) 24h后，100g离心弃去上清，换成不含Y-27632的胰腺祖细胞维持培养基继续维持培养，每天换液。

培养注意事项

1. 冻存可用逸漠生物无血清冻存液(IMC-701)添加20uM Y27632冻存。