前脑神经干祖细胞(fNSPC)扩增培养基

产品描述

前脑神经干祖细胞(fNSPC)扩增培养基是一种适用于人多能干细胞来源前脑神经干祖细胞，无血清，无动物源成分的完全培养基，fNSPC在本培养基中可以持续存活传至少3代而维持特性不变，适用于体外研究。

产品信息

表1. fNSPC扩增培养基组成信息

注：括号内容如50×为母液浓度，使用时终浓度需为1×。例如fNSPC培养基补充剂(50×)需添加进fNSPC扩增基础培养基使其稀释50倍，使得补充剂终浓度为1×，配成fNSPC扩增培养基。

实验试剂与材料

表2. 推荐试剂&材料

实验内容与方法(以6孔板1个孔为例)

一、完全培养基配制

(1) 在 4℃解冻fNSPC培养基补充剂(50×)，不要在 37℃条件下解冻。

(2) 在生物安全柜中，按照实验用量，例如若用量为50 mL，配制方法为49 mL fNSPC扩增基础培养基+1 mL fNSPC培养基补充剂(50×)配成fNSPC扩增培养基。

(3) 培养基建议现配现用，置于 4℃储存，2 周内使用。

注：补充剂可根据使用量进行分装以避免反复冻融。

二、fNSPC复苏

(1) 将含有1 mL细胞悬液的冻存管在 37℃水浴中迅速摇晃解冻，加5 mL fNSPC扩增基础培养基(含10μM Y-27632)混合均匀。

(2) 在300 g条件下离心3 min，弃去上清液，加2 mL fNSPC扩增培养基(含10μM Y-27632)后吹匀。加入基质胶包被的六孔板(1孔)或35mm皿中培养过夜。

(3) 24h后，换成不含Y-27632的fNSPC扩增培养基，每隔1天换液。

三、细胞传代

(1) 弃去培养基，2mL 1x室温PBS(不含Ca2+/Mg2+)清洗细胞，加入1 mL室温的Accutase，置于37℃培养箱消化3-4 min。。

(2) 3-4 min后每孔加入等量fNSPC扩增培养基，轻轻吹打细胞，使细胞解离成单细胞。

(3) 将细胞悬液收集到15 mL离心管中，室温下300 g离心3 min。

(4) 仔细抽吸上清液，不干扰细胞，用1mL恢复室温的fNSPC扩增培养基重悬细胞，轻轻地上下移液以确保细胞溶液均匀。

(5) 使用fNSPC扩增培养基稀释细胞，以1:4比例接种到基质胶包被的六孔板或35mm皿中培养。每隔1天换液。