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ATCC细胞培养
产品规格：100 mL
¥68
产品规格：100 mL
¥80
产品规格：50mL *10
¥3500
皮质神经元(Cortical neuron，CN)维持培养基是一种适用于人多能干细胞来源皮质神经元，无血清、成分明确的完全培养基，CN在本培养基中可以持续存活至少4周而维持特性不变，适用于体外研究。
表1. CN维持培养基组成信息
| 产品名称 | 产品规格 | 储存 |
| CN维持基础培养基 | 200 mL | 2℃-8℃，12个月 |
| CN维持培养基补充剂（20×） | 10 mL | -20℃，6个月 |
注：括号内容如20×为母液浓度，使用时终浓度需为1×。例如CN维持培养基补充剂(20×)需添加进CN维持基础培养基使其稀释20倍，使得补充剂终浓度为1×，配成CN维持培养基。
表2. 推荐试剂&材料
| 试剂&材料 | 品牌（e.g.） | 货号（e.g.） |
| Y-27632 | - | IMC-014-Y |
| DMEM/F12培养基 | - | IMC-205 |
| TrypLE™ Express 酶 (1X)，酚红 | Gibico | 12605010 |
| 神经细胞无血清冻存液 | - | IMC-704 |
| PBS | - | IMC-401 |
| 6孔细胞培养板 | NEST | - |
| 15 mL/50 mL离心管 | 硕华生物 | - |
| 10 μL/200 μL/1000 μL无菌吸头 | 佳顺生物 | - |
| 10mL/50mL移液管 | NEST | - |
| Matrigel | Corning | 354277 |
一、完全培养基配制
(1) 在 4℃解冻CN维持培养基补充剂(20×)不要在 37℃条件下解冻。
(2) 在生物安全柜中，按照实验用量，例如若用量为50 mL，配制方法为48 mL CN维持基础培养基+2 mL CN维持培养基补充剂(20×)配成CN维持培养基。
(3) 培养基建议现配现用，置于 4℃储存，2 周内使用。
注：补充剂可根据使用量进行分装以避免反复冻融。
二、CN复苏
(1) 将含有1 mL细胞悬液的冻存管在 37℃水浴中迅速摇晃解冻，加5 mL CN维持培养基(含10μM Y-27632)混合均匀。
(2) 在1000 rpm条件下离心3 min，弃去上清液，加2 mL CN维持培养基(含10μM Y-27632)后吹匀。加入基质胶包被的六孔板(1孔)或35mm皿中培养过夜。
(3) 24h后，换成不含Y-27632的CN维持培养基，每隔2-3天换液。
三、细胞接种(当有实验需求时可消化下来按实验需求接种)
(1) 弃去培养基，加入1-2 mL Accutase(含10μM Y-27632)，置于37℃培养箱消化2-5min。
(2) 2-5 min后每孔加入等量 CN维持培养基(含10μM Y-27632)，轻轻吹打细胞，使细胞解离成单细胞。
(3) 将细胞悬液收集到15 mL离心管中，室温下300 g离心5 min。
(4) 仔细抽吸上清液，不干扰细胞，用1mL恢复室温的CN维持培养基重悬细胞(含10μM Y-27632)，轻轻地上下移液以确保细胞溶液均匀。
(5) 使用CN维持培养基(含10μM Y-27632)稀释细胞，将细胞按实验需求密度接种到基质胶或laminin包被的六孔板(1孔)或35mm皿中培养过夜。24h后，换成不含Y-27632的CN维持培养基，视培养基颜色或隔2天换液。
如何判断原代细胞衰老了
1.形态学的观察，细胞突起变大、或细胞扁平;2.β半乳糖苷染色判断细胞是否衰老;3.增殖速率明显下降;4.对相关的标志物进行检测。
如何确保分离的原代细胞的活性
1.组织离体时间不能太久;2.低温冰上分离，但也不能直接从-80℃冰箱上取出一块冰;3.无菌操作体系;4.消化酶的浓度和消化时间的把控。
原代细胞可以无限的增殖
与细胞系不同，原代细胞具有有限的扩增能力。建议尽早使用原代细胞进行实验以防止遗传漂移。此外，如果你正在使用一个增值困难的细胞类型，你应该密切监测细胞形态，因为少量混杂的细胞(如成纤维细胞)可能随着时间的推移，大量生长从而成为主要细胞。
如何让原代细胞一直保持增殖能力
原代细胞传代有限，可以通过构建永生化细胞株使其获得无限增殖的能力，即转变为永生化细胞系。
原代细胞一般第几代做实验比较好
5代以内，3代最好。有些细胞比如特殊，如神经元、巨噬为终末分化细胞，增殖能力很弱，建议客户收到细胞请镜下观察细胞生长状态后直接用于后续实验，不建议传代进行扩增培养和冻存。
原代细胞可以冻存吗？冻存复苏后活率差的原因是什么?
这取决于细胞的类型。一些细胞类型像神经细胞，神经胶质细胞和一些生长缓慢的上皮细胞，不推荐扩增培养和再次冻存。其它的细胞类型像成纤维细胞、星形细胞、肾系膜细胞、星形胶质细胞等等，可以扩增培养和再次冻存。然而，需要注意的是再次冻存的过程可能导致细胞生长性能的改变。冻存后复苏活率低需要考虑冻存前细胞活性，细胞量以及冻存体系，冻存体系是指用的含血清的冻存液，还是一步冻存液，不同冻存方法对应的操作方法不同需要注意。
通常我们不推荐重新冻存原代细胞，因为这可以促进细胞衰老和/或导致功能变化。原代细胞非常敏感，重新冻结可能导致细胞死亡或损伤。
贴壁的原代细胞很难消化是怎么回事
细胞初代培养时在细胞皿上培养的时间过长，解决方法可以将酶的浓度降低，37℃培养箱中延长消化时间，或者分步消化。
原代上皮细胞传代之后形态发生变化
上皮细胞，传代容易变形，上皮细胞传代后，不容易再次贴壁，这个时候可以使用代膜的培养瓶或者瓶子包被一下(基质胶，鼠尾胶原，多聚赖氨酸等)都可以，上皮细胞，传代非常有限， 且生长比较慢，一般建议尽快实验，不适合长时间去大量扩增培养。
因原代细胞体外传代有限，传代次数皆为大部分人使用后的平均数据，受操作手法，培养环境，培养条件等因素综合影响，建议收到后，尽快完成实验，不建议反复冻存一直传代扩增。
提取原代细胞经常发生污染可以怎样改善
首先要确保细胞分离实验室是否存在细菌污染，如果存在问题，需要将实验室进行消毒，培养箱灭菌，检查试剂耗材是否可用，第二个就是注意无菌操作，保证试剂、剪刀镊子等无菌，第三是可以在培养液中加抗生素，双抗、两性霉素等。
1.细胞运输途中遭遇的各种问题，细胞丢失、瓶身破损、培养液严重漏液，细胞未开封，如出现污染状况等，重发
2.客户操作造成细胞污染，细胞状态不好，非我司推荐细胞培养体系，未提供真实清晰的培养前3天的细胞状态照片，不重发
3.原代细胞不建议客户自行冻存，收货后及时传代并安排实验，超出代数的细胞可能出现突变、状态变差等现象导致细胞无法进一步传代或者进行实验，对于自行冻存的细胞一律不予免费售后
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