皮质神经元(CN)维持培养基

产品描述

皮质神经元(Cortical neuron，CN)维持培养基是一种适用于人多能干细胞来源皮质神经元，无血清、成分明确的完全培养基，CN在本培养基中可以持续存活至少4周而维持特性不变，适用于体外研究。

产品信息

表1. CN维持培养基组成信息

注：括号内容如20×为母液浓度，使用时终浓度需为1×。例如CN维持培养基补充剂(20×)需添加进CN维持基础培养基使其稀释20倍，使得补充剂终浓度为1×，配成CN维持培养基。

实验试剂与材料

表2. 推荐试剂&材料

实验内容与方法(以6孔板1个孔为例)

一、完全培养基配制

(1) 在 4℃解冻CN维持培养基补充剂(20×)不要在 37℃条件下解冻。

(2) 在生物安全柜中，按照实验用量，例如若用量为50 mL，配制方法为48 mL CN维持基础培养基+2 mL CN维持培养基补充剂(20×)配成CN维持培养基。

(3) 培养基建议现配现用，置于 4℃储存，2 周内使用。

注：补充剂可根据使用量进行分装以避免反复冻融。

二、CN复苏

(1) 将含有1 mL细胞悬液的冻存管在 37℃水浴中迅速摇晃解冻，加5 mL CN维持培养基(含10μM Y-27632)混合均匀。

(2) 在1000 rpm条件下离心3 min，弃去上清液，加2 mL CN维持培养基(含10μM Y-27632)后吹匀。加入基质胶包被的六孔板(1孔)或35mm皿中培养过夜。

(3) 24h后，换成不含Y-27632的CN维持培养基，每隔2-3天换液。

三、细胞接种(当有实验需求时可消化下来按实验需求接种)

(1) 弃去培养基，加入1-2 mL Accutase(含10μM Y-27632)，置于37℃培养箱消化2-5min。

(2) 2-5 min后每孔加入等量 CN维持培养基(含10μM Y-27632)，轻轻吹打细胞，使细胞解离成单细胞。

(3) 将细胞悬液收集到15 mL离心管中，室温下300 g离心5 min。

(4) 仔细抽吸上清液，不干扰细胞，用1mL恢复室温的CN维持培养基重悬细胞(含10μM Y-27632)，轻轻地上下移液以确保细胞溶液均匀。

(5) 使用CN维持培养基(含10μM Y-27632)稀释细胞，将细胞按实验需求密度接种到基质胶或laminin包被的六孔板(1孔)或35mm皿中培养过夜。24h后，换成不含Y-27632的CN维持培养基，视培养基颜色或隔2天换液。