胰岛细胞维持培养基

产品描述

胰岛细胞维持培养基是一种适用于人多能干细胞来源胰岛细胞，无血清，无动物源成分的完全培养基，胰岛细胞在本培养基中可以持续存活至少一个月而维持特性不变，适用于体外研究。

产品信息

表1. 胰岛细胞维持培养基组成信息

注：括号内容如25×为母液浓度，使用时终浓度需为1×。例如胰岛细胞培养补充剂(25×)需添加进胰岛细胞维持基础培养基使其稀释25倍，使得补充剂终浓度为1×，配成胰岛细胞维持培养基。

实验试剂与材料

表2. 推荐试剂&材料

实验内容与方法(以6孔板1个孔为例)

一、完全培养基配制

(1) 在 4℃解冻胰岛细胞培养补充剂(25×)不要在 37℃条件下解冻。

(2) 在生物安全柜中，按照实验用量，例如若用量为50 mL，配制方法为48 mL 胰岛细胞维持基础培养基+2 mL 胰岛细胞培养补充剂(25×)配成胰岛细胞维持培养基。

(3) 培养基建议现配现用，置于 4℃储存，2 周内使用。

注：补充剂可根据使用量进行分装以避免反复冻融。

二、胰岛细胞复苏

(1) 将含有1 mL细胞悬液的冻存管在 37℃水浴中迅速摇晃解冻，加10 mL DMEM培养基(含10μM Y-27632)混合均匀。

(2) 300g离心3min，弃去上清，加1 mL 胰岛细胞维持培养基(含10μM Y-27632)重悬，按实验要求细胞量进行接种，培养24h。

(3) 24h后，100g离心弃去上清，换成不含Y-27632的胰岛细胞维持培养基进行维持培养，隔天换液。

三、细胞消化接种

(1) 对于六孔板1孔，将悬浮生长的胰岛细胞球100g离心3min，弃去上清，加入1毫升Accutase(含10µM Y27632)转移至孔板中，于37℃摇床90 rpm摇12-15min。

(2) 300g离心3min，弃去上清，加1 mL 胰岛细胞维持培养基(含10μM Y-27632)重悬，按实验要求细胞量进行接种，培养24h。

(3) 24h后，100g离心弃去上清，换成不含Y-27632的胰岛细胞维持培养基继续维持培养，隔1-2天换液。

培养注意事项

1. 复苏时六孔板1孔至少接种1×106个细胞。

2. 若想确保悬浮长成的胰岛细胞球直径大小均一，可按六孔板每孔5×106个细胞使用胰岛细胞维持培养基+10µM Y27632接种于6孔板微孔板( STEMCELL Technologies, 27940)中300g离心5min，培养24h成球，24h后换成不含Y27632的胰岛细胞维持培养基转移至37℃摇床90rpm继续培养。