hPSC诱导肝类器官成熟培养基

产品描述

本产品为hPSC诱导肝类器官成熟培养基，可以维持hPSC诱导分化肝类器官试剂盒(IMV-H001)诱导分化获得的肝类器官的长期生长、传代扩增。

实验仪器、材料

仪器：生物安全柜、细胞培养箱、水平式离心机、倒置显微镜、低温冰箱

材料：细胞培养板(规格为：6孔、12孔、24孔)、离心管(规格为15 mL 和 50 mL)、移液器(规格为 10 μL、100 μL、1000 μL)、无菌吸头(规格为 10 μL、200 μL 和 1000 μL)、移液管(规格为10mL、50mL)

产品规格

实验内容与方法

肝类器官换液

吸去孔中培养基，每孔加入700μL 恢复到室温的肝类器官成熟培养基进行长期培养，每隔一天更换培养基，7-10天传代。

肝类器官传代

(1)取出冷冻的基质胶置于4℃解冻，并提前将枪头放置在-20℃预冷1h;

(2)吸除培养基，加入1mL预冷的PBS溶解基质胶，将混合液转移到1.5mL EP管中，300g离心5min，去除上层的PBS和基质胶;

(3)加入1mL Tryple express，吹打5-8次，使类器官与Tryple express充分接触，接着转移到培养箱中，静置解离5min;

(4)5min后取出EP管，300g离心5min，去除上清，再加入1ml DMEM/F12，吹打孔中混合物40-50次，使类器官团彻底解离成单细胞，离心，去上清;

(6)用预冷枪头按每孔30μL的量在离心管中加入适量的基质胶，吹打5-8次，均匀混合单细胞-基质胶，注意吹打过程中避免产生气泡;

(7)将提前放在培养箱中的24孔板取出，在孔中心位置加入30μL胶滴，缓慢打入混合液时，逐渐向上移动枪头，使细胞均匀分布在胶中;

(8)将培养板放在培养箱中，20-30min，使胶滴凝固;

(9)小心沿孔壁加入700μL恢复室温的肝类器官成熟培养基，注意不要碰到胶滴;

(10)将孔板放到培养箱中，继续培养，每隔1天换液一次(可周一、周三、周五换液，周五可添加至800μL，周六、周日不换液)，1周左右传代一次。

(11)肝类器官成熟后可进行染色鉴定或肝祖细胞/肝干细胞检测。