hPSC诱导分化肾类器官试剂盒

产品描述

本试剂盒专为人诱导多能干细胞(hPSC)高效分化为肾类器官而设计，提供标准化、无血清、化学成分明确的培养体系，适用于疾病模型构建、药物筛选及细胞治疗研究，获得的肾类器官包含足细胞、近端小管、远端小管，能表达特异性标志物(如 POXDL、LTL、E-CAD等)，适用于体外研究。

本产品需要操作人员具有细胞培养经验，对细胞长期培养具有一定了解。

以12孔板为例，本产品提供的规格最少可供12个孔的hPSC诱导分化，根据细胞状态与细胞株特性，每孔最终可获得10-100个左右不等的肾类器官。

本产品分化流程图

hPSC：人多能干细胞;

产品信息

表1. 试剂盒组成信息

注：括号内容如50×为母液浓度，使用时终浓度需为1×。例如补充剂A(50×)需添加进基础培养基使其稀释50倍，使得补充剂终浓度为1×，配成诱导培养基1。

实验试剂与材料

表2. 推荐试剂&材料

实验内容与方法(以hESC H1及12孔板1个孔为例)

一、试剂准备

表3. 各阶段培养基成分

(1) 在 4℃解冻 补充剂 A、B、C、D，不要在 37℃条件下解冻。

(2) 在生物安全柜中，参考表1及表 3，按照比例使用无菌移液管及枪头混匀配制成分化各阶段培养基 。例如诱导培养基1组成为基础培养基、1×浓度的补充剂A，若用量为50mL，配制方法为49 mL基础培养基+1 mL补充剂A(50×)。

(3) 分化培养基建议现配现用，置于 4℃储存，2 周内使用。

注：所有补充剂可根据使用量进行分装以避免反复冻融。

二、DAY 0-4:晚期原始条纹阶段

(1) 生长因子减量基质胶在4℃下解冻，与DMEM/F12均匀混合(基质胶:DMEM/F12=1:100)，铺板，备用。

(2) DAY -1: 当hESC在生长因子减量基质胶上生长的汇合度达到约40%-50%左右时(如下图所示密度)，吸去培养基，加入1 mL含1%DMSO 的多能干细胞维持培养基培养24h。

(3) DAY 0: 吸去培养基，并加入1 mL 诱导培养基1(成分为：基础培养基，1×补充剂A)。

(4) 根据培养基颜色每天或隔天使用诱导培养基1换液，直到第4天(细胞状态如下图)。

注：①基质胶使用时需在冰上操作，所有与基质胶直接接触的物品需提前预冷，基质胶超过10℃将迅速凝固，导致铺板失败。

②若细胞在第3天大量漂浮，或第3天换液时有漂浮卷边趋势，可添加10uM Y27632直到第4天。

三、DAY 4-7:后中间中胚层阶段

(1) DAY 4： 从培养物中抽吸培养基，使用1 mL预热的诱导培养基2(成分为：基础培养基，1×补充剂B)换液。

(2) 根据培养基颜色每天或隔天使用诱导培养基2换液，直到第7天(细胞状态如下图)。

四、DAY 7-9: 肾祖细胞阶段

(1) DAY 7: 第7天，从培养物中抽吸培养基，使用1 mL预热的诱导培养基3(成分为：基础培养基，1×补充剂C)换液。

(2) 根据培养基颜色每天或隔天更换培养基，直到第9天(细胞状态如下图)。

五、DAY 9-11: 肾小管前聚集体阶段

(1) DAY 9: 从培养物中抽吸培养基，使用1 mL预热的诱导培养基4(成分为：基础培养基，1×补充剂D)换液。

(3) 根据培养基颜色每天或隔天更换培养基，直到第11天(细胞状态如下图)。

六、DAY 11-14: 肾小管前聚集体阶段

(1) DAY 11: 从培养物中抽吸培养基，使用1 mL预热的诱导培养基3(成分为：基础培养基，1×补充剂C)换液。

(2) 根据培养基颜色每天或隔天更换培养基，直到第14天(细胞状态如下图)。

七、DAY 14-21或40: 肾类器官成熟阶段

(1) DAY 14: 从培养物中抽吸培养基，使用1 mL预热的基础培养基换液。

(4) 根据培养基颜色每天或隔1-2天更换培养基，直到第21天(细胞状态如下图)。

注：第21天可检测到足细胞、近端小管、远端小管等肾类器官结构，若想继续成熟可培养至第40天。

免疫荧光鉴定

肾脏类器官单细胞测序分析

培养类器官图片