hiPSC诱导分化心脏类器官试剂盒

产品介绍

本产品为iPSC诱导分化心脏类器官试剂盒，人诱导多能干细胞hiPSC通过该试剂盒诱导分化可得到心脏类器官，该类器官由心肌细胞、心外膜细胞等细胞组成，成熟后的类器官有腔室结构，具有早期搏动功能。 本试剂盒需要操作人员具有hiPSC培养经验，对类器官具有一定了解。
注意：本产品仅提供给进一步科研使用，不可用于临床治疗等其他用途。

hiPSC诱导分化心脏类器官试剂盒

实验仪器、材料

仪器：生物安全柜、细胞培养箱、水平式离心机、倒置显微镜、低温冰箱
材料：细胞培养板（规格为：96孔）、离心管（规格为15 mL、50 mL）、移液器（规格为 10 μL、100 μL、1000 μL）、无菌吸头（规格为 10 μL、200 μL 和 1000 μL）、移液管（规格为10 mL、50 mL）

操作步骤

Ⅰ阶段（D0-2）（按1个96孔板，每孔100 μL算）
（1）当hiPSC的汇合度达到75%-85%，吸去培养基，用2 mL 1x室温PBS（不含Ca2+/Mg2+)清洗hiPSC，吸去PBS。
（2）加入1 mL含Y-27632（10 μM）的室温EDTA，转移到37℃ 5% CO2细胞培养箱中5 min。
（3）5 min后，将干细胞传代培养基以等体积直接加入EDTA中，并使用P-1000吸头轻轻上下吹打细胞，制成单细胞悬液，将细胞单悬液收集到15mL离心管中，室温下300 g离心5 min。
（4）离心结束，充分去除上清，将1 mL预热的干细胞培养基（含10 μM Y-27632）重悬细胞，轻轻地上下移液以确保单细胞溶液均匀。
（5）使用自动细胞计数器计数细胞，使用台盼蓝排除死亡细胞，按每孔5000个细胞的比例将所需细胞收集到离心管中，将10 mL基础培养基1与20μL补充剂A充分混合，并加入到离心管中，将细胞吹打均匀，然后按每孔100μL的体积将细胞悬液接种到96孔板中，1000 rpm离心5min，然后将孔板转移到37℃、5%CO2细胞培养箱中孵育24h。
（6）在第1天和第2天，吸去培养基，加入10 mL基础培养基1使细胞形成EB。
Ⅱ阶段（D3-4）
第3天，将9.94 mL基础培养基2与60 μL补充剂B充分混匀，配置成Ⅱ阶段培养基，从孔中抽吸培养基，按每孔100 μL的体积将Ⅱ阶段培养基加入孔中，将培养板放入37℃ 5%CO2培养箱中培养，连续培养2天。
Ⅲ阶段（D5-6）
第5天，将9.98 mL基础培养基3与20 μL补充剂C充分混匀，配置成Ⅲ阶段培养基，从孔中抽吸培养基，按每孔100 μL的体积将Ⅲ阶段培养基加入孔中，将培养板放入37℃ 5%CO2培养箱中培养，连续培养2天。
Ⅳ阶段（D7-21）
（1）第7天，从孔中抽吸培养基，按每孔100 μL的体积将基础培养基4加入孔中，将培养板放入37℃ 5%CO2培养箱中培养，开始长期培养，每2天换一次培养基。
（2）心脏类器官将在分化后的10-13天开始跳动，进一步培养后第19-21天取样鉴定。

流程图及参考图片