hPSC诱导结肠类器官成熟培养基

产品描述

本产品为hPSC诱导结肠类器官成熟培养基，可以维持hPSC诱导分化结肠类器官试剂盒(IMV-C002)诱导分化获得的结肠类器官的长期生长、传代扩增。

该诱导分化成熟培养基不含补充剂G含量，仅用于后续结肠类器官的扩增使用，若初次诱导分化结肠类器官，请使用hPSC诱导分化结肠类器官试剂盒(IMV-C002)，在初始分化结肠类器官阶段添加补充剂G，以免影响结肠类器官分化效率。

本产品需要操作人员具有hPSC细胞培养经验，对类器官具有一定了解。

实验仪器、材料

仪器：生物安全柜、细胞培养箱、水平式离心机、倒置显微镜、低温冰箱

材料：细胞培养板(规格为：6孔、12孔、24孔)、离心管(规格为15 mL 和 50 mL)、移液器(规格为 10 μL、100 μL、1000 μL)、无菌吸头(规格为 10 μL、200 μL 和 1000 μL)、移液管(规格为10mL、50mL)

产品规格

其他相关试剂

实验内容与方法

1、更换人结肠类器官成熟培养基(HCO)

(1)初次诱导分化结肠类器官后，3天进行一次HCO成熟培养基(不含补充剂G)的更换，并向每个培养孔中新增500μL HCO成熟培养基(不含补充剂G)，在 37°C、5% CO₂ 和 95% 湿度下进行培养。

(2)每周进行3次培养基更换，并每隔10-14天将类器官培养物转移到新的含基质胶的培养基中，更换时应按照适当传代比例(每个培养皿约80-100个器官细胞数)进行操作。

注：在第一次传代后，可将抗生素(如 50μg/ml 庆大霉素)加入到培养基中

(3)经过第3次传代后，结直肠组织细胞团应已完全形成，即可进行鉴定和相关实验。

注：经过多次传代后，细胞生长速度可能会下降，这可能是由于间充质细胞及干细胞数量减少的原因。

2、人结肠类器官传代

(1)吸除培养基，加入预冷的PBS溶解基质胶，将混合液转移到离心管中，300g离心 3min，去除上层的 PBS和基质胶。注：所有与类器官接触的耗材都需要用抗粘附液润洗1-2次，例如枪头与离心管等。

(2)加入 1mL Tryple，吹打5-8次，使类器官与Tryple 充分接触，接着转移到培养箱中，静置消化2-3分钟，具体时间需根据类器官大小和密度优化。 再加入4ml HCO成熟培养基(不含补充剂G)终止消化，吹打使类器官变成小细胞团，300g 离心3min，去除上清;注：不要完全消化成单细胞或者太小的细胞团。

(3)用预冷枪头按每孔30-40μL 的量在离心管中加入适量的基质胶，在冰上快速、轻柔地混合均匀，注意吹打过程中避免产生气泡;

(4)将提前放在培养箱中的24孔板取出,将细胞-基质胶混合液快速滴加至预热的培养板孔中央，滴加混合液时，逐渐向上移动枪头，使细胞均匀分布在胶中;

(5)将培养板放在培养箱中，正置孵育20-30min，使胶滴凝固;

(6)胶滴凝固后，沿孔壁缓慢加入预热好的HCO成熟培养基(不含补充剂G)。将培养板放回培养箱，定期(如每2-3天)更换培养基，并在显微镜下观察类器官的生长和形态。

3、人结肠类器官冻存

(1)吸除培养基，加入预冷的PBS溶解基质胶，将混合液转移到离心管中，300g离心 3min，去除上层的 PBS和基质胶，如果无法去除，建议使用类器官回收液去胶。注：所有与类器官接触的耗材都需要用抗粘附液润洗1-2次，例如枪头与离心管等。

(2)加入 1mL Tryple，吹打5-8次，使类器官与Tryple 充分接触，接着转移到培养箱中，静置消化2-3分钟，具体时间需根据类器官大小和密度优化。 再加入4ml HCO成熟培养基(不含补充剂G)终止消化，吹打使类器官变成小细胞团，300g 离心3min，去除上清;

注：不要完全消化成单细胞或者太小的细胞团。

(3)加入冻存液，混匀，程序降温后置于液氮保存。