CD 293 无血清培养基

产品简介

CD 293无血清培养基是用于HEK293细胞无血清悬浮培养和目标分子表达的培养基。产品中含有 4mM 谷氨酰胺、6g/L 葡萄糖、1.5 g/L PF68 等有利于HEK细胞无血清生长和表达的组分。产品不含任何动物源成分、蛋白、水解物、酚红和 EDTA，有利于建立稳定的 HEK细胞无血清表达系统。CD 293无血清培养基是一种化学成分界定的培养基，用于支持多种 HEK细胞无血清高密度生长以及高效转染表达，在转染后的表达阶段同时配套使用CD 293 Feed ，可以应用于重组蛋白的表达以及腺相关病毒 (Adeno-Associated Virus, AAV)、慢病毒 (Lentivirus, LV)、腺病毒 (Adenovirus,AdV) 等病毒载体的包装和扩增。

产品参数

产品特点

专用于HEK293无血清的悬浮培养与高效的转染表达

无动物源组分，无血清，无抗生素

转染前后无需更换培养基

质控严格，效果稳定

使用说明

一、细胞复苏

1. 在 37℃水浴中快速解冻(<1 分钟)冻存管中的细胞。

2. 将全部细胞液转移至含有 30 mL 预热的CD 293无血清培养基的 50 mL 无菌离心管中，233 ×g(约 1000 rpm)离心5 分钟，弃上清，使用 20 mL CD 293无血清培养基重悬，此时细胞密度应为 0.4–0.6×106cells/mL。

3. 参照“培养条件”培养细胞。

4. 72 ± 4 小时，进行细胞的传代扩增，传代方法参照“细胞传代与扩增”步骤。

二、细胞传代与扩增

1. 复苏后72±4小时细胞处于对数生长中期，此时检测活细胞密度 (×106cells/mL) 及细胞活率(%)，进行细胞传代。

2. 当活细胞密度≥2.0×106cells/mL，活率>90%，按照 0.8–1.2×106 cells/mL 的接种密度进行传代，参照“培养条件”进行培养。

3. 瞬时转染前，细胞需要在 CD 293 无血清培养基中至少进行 3 次传代。

三、细胞适应性传代

直接适应

1. 将培养至对数生长中期、细胞活率>90%的细胞从其他培养基中直接接种到 CD 293 无血清培养基中，接种密度为0.8–1.2 × 106 cells/mL，参照“培养条件”进行培养。

2. 建议首次转移后每天检测活细胞密度 (× 106 cells/mL) 及细胞活率 (%)。

3. 若细胞密度在接种后第 3 天达到 4 × 106 cells/mL 左右，活率>90%，可视为细胞已成功适应 CD 293 无血清培养基。

4. 细胞适应后，至少传代 3–5 次，待细胞生长稳定后再开展其它应用。

梯度适应

1. 如果细胞在直接驯化时状态欠佳，建议采用梯度驯化。

2. 按照 0.8–1.2×106cells/mL 的密度接种，将细胞逐步适应至原培养基与 CD 293 无血清培养基以不同比例 ( 90:10、75:25、50:50、25:75、0:100) 混合的培养基中。

3. 每种混合培养基进行传代时，如果细胞密度达到3×106cells/mL 左右，活率>90%，方可进行下一个梯度的驯化。

一般需要传代 2–3 次，可根据细胞生长状态进行调整。

4. 在 100%使用 CD 293 无血清培养基接种第 3 天后，若细胞密度稳定在 4 × 106 cells/mL 左右，活率> 90%，可视为细胞已成功适应 CD 293 无血清培养基。

5. 细胞适应后，至少传代 3–5 次，待细胞生长稳定后再开展其它应用。

四、细胞冻存

建议采用处于对数生长期，细胞活率>90%细胞进行冻存。

1. 以 90% CD 293 无血清培养基与 10% DMSO 混合制备冻存培养基，储存于 2-8℃预冷直至使用。

2. 检测活细胞密度 (×106cells/mL)，计算出冻存培养基所需的体积，使得最终冻存体积为每支 1mL，冻存密度为10.0×106 cells/mL。

3. 细胞液通过 233×g(约 1000 rpm)离心5分钟，弃上清，收获细胞重悬至预定体积的冻存培养基中得到细胞冻存悬液。

4. 将细胞冻存悬液分装至冻存管中，立即转移至已经预冷的程序降温盒中，进行程序降温后，转入液氮罐长期保存。

五、培养条件

培养方式：悬浮

培养容器：TPP管/摇瓶

摇床转速：TPP 管培养，轨道直径为 50 mm 的摇床，建议 200 rpm;

摇瓶培养，轨道直径为 25 mm 的摇床，建议 125–150 rpm;

摇瓶培养，轨道直径为 50 mm 的摇床，建议 90–120 rpm。

培养温度：37℃

CO2浓度：5%

相对湿度：80% RH