人正常肠类器官（分化）完全培养基

产品描述

人正常肠类器官(分化)完全培养基(Human Intestines Organoid Medium)是一款适用于人正常肠类器官进一步分化的完全培养基，以3D方式分化后的肠类器官具有更明显的出芽状结构，具有更接近于体内的细胞分布，更明显的杯状细胞和肠内分泌细胞的表达。

产品信息

表1. 培养基组成信息

人正常肠类器官(分化)完全培养基的制备

1. 收到类器官培养基后，将培养基置于四度冰箱进行解冻;

2. 将解冻后培养基上下颠倒充分混匀，在无菌的生物安全柜或超净工作台中将培养基进行分装，推荐分装成10ml规格;

3.将分装后的培养基储存于-20℃，使用时拿出分装后的培养基解冻后即可使用。

注意：

l 分装后的类器官培养基需储存于-20℃，有效期一年，注意避免反复冻融;

l 解冻后类器官完全培养基可在 4°C 储存，建议在两周内使用;

l 类器官培养基中内含有抗生素。

人正常肠类器官的分化培养

1、待类器官用人源正常肠道类器官扩张培养基培养到成熟后(或变黑不再增大时)，即可进行类器官的分化培养。用经过润洗液润洗的枪头吹打刮取类器官，并将肠类器官和培养基悬液转移至经过润洗液润洗的1.5mL EP管中。

2、用经过润洗液润洗的枪头用力吹打重悬类器官悬浮液，多次吹打(5~10 次)使肠类器官与基质胶分离吹，300 g 离心 3 min。

3. 弃上清，加入1mL类器官传代消化液重悬类器官沉淀，37℃二氧化碳培养箱消化3~10 min，每3 min取少量悬液镜检观察类器官状态，类器官已分散成碎片后机械吹打分散类器官后300g离心3 min。

4.弃上清，用类器官专用基础培养基清洗2 次。

5. 用适量的基质胶重悬清洗后的类器官沉淀，重悬后置于冰上，重悬时间不超过 30 s 以避免基质胶过早凝固。

注意：基质胶稀释比例应在 70%以上以保证培养过程中基质胶的结构稳定性。

6. 将基质胶和类器官的混合悬液点入 24 孔板底部正中央，避免悬液接触孔板侧壁，每孔 30 μL 左右。

注意：为防止基质胶室温凝固，此步骤应尽快完成。

7. 将接种完成后的培养板至于 37℃二氧化碳恒温培养箱中，孵育 15 min 左右待基质胶凝固后取出。

8. 待基质胶完全凝固后，沿孔壁加入提前预热的人肠类器官(分化)完全培养基，24孔板每孔 500 μL。

9. 将细胞培养板放入37℃培养箱中进行培养，密切观察人肠类器官的生长状态，每 3 天于倒置显微镜下拍照，记录多个视野中的人肠类器官的形态和分布。